[发明专利]组织工程化角膜上皮移植膜及其制备方法和应用

权利要求书

1.制备组织工程化角膜上皮移植膜的方法，包括：

1)取人角膜缘组织利用植块培养法在体外原代培养、传代培养人 角膜上皮细胞；

2)选择具有角膜上皮细胞特异性的原代培养、传代培养人角膜上 皮细胞；

3)构建组织工程角膜支架材料；和

4)将步骤1)和2)所得体外培养的人角膜上皮细胞种接种于步骤 3)所得组织工程角膜支架上，共同在体外培养，最终得到组织工程化 角膜上皮移植膜；

其中步骤1)中在体外培养人角膜上皮细胞的方法包括：

(1)在角膜缘取角膜缘组织块，并用含有1％青霉素-链霉素的 D-PBS缓冲液冲洗；

(2)于中性蛋白酶，优选dispase II消化液中4℃下放置过夜，然 后D-PBS缓冲液冲洗；

(3)再用0.25％胰蛋白酶-EDTA在37℃处理10分钟，于含10％FBS DMEM培养液中中和胰酶；

(4)待置于培养皿中的经上述处理的角膜缘组织块完全贴壁后， 在含10％FBS DMEM培养液中37℃5％二氧化碳培养箱里培养；

其中步骤3)所述组织工程角膜支架材料为无抗原性或抗原性较低 的人源或非人源脱细胞角膜基质。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述脱细胞角膜基质是猪脱 细胞角膜基质或狗脱细胞角膜基质。