[发明专利]一种乳粉中乳糖含量测定方法

说明书

技术领域

本发明属于乳糖检测技术，是基于乳糖在苯酚、氢氧化钠、苦味酸和亚硫酸氢钠作用下生成桔红色的络合物，结合自行开发的RQS1.0图像分析软件提取色度信息，完成的一种乳粉中乳糖含量测定方法。

背景技术

乳糖是乳粉中主要的碳水化合物，是乳粉的特征指标之一。目前可行的乳糖测定方法有多种。其中，国家规定的标准方法有：GB/T 5009.7-2003《食品中还原糖的测定》，GB/T 5413-1997《婴幼儿配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和总糖的测定》，以及SN/T 0871-2000《进出口乳及乳制品中乳糖的测定方法》。

GB/T 5009.7-2003《食品中还原糖的测定》规定了直接滴定法和高锰酸钾滴定法两种方法。直接滴定法的原理是：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液)，根据样品液消耗体积计算还原糖的含量。高锰酸钾滴定法的原理是：试样经除去蛋白质后，其中还原糖将铜盐还原为氧化亚铜，加入硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量，计算氧化亚铜含量，再查《相当于氧化亚铜质量的葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖质量表》得还原糖量。

GB/T 5413-1997《婴幼儿配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和总糖的测定》规定了高效液相色谱法、莱因-埃农氏法和酶-比色法测定乳糖含量的方法。其中莱因-埃农氏法的原理是：样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，样液中的乳糖将费林氏液中的二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝为指示剂，在终点稍过量时，乳糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。

以上这几种方法其原理是相似的，都是利用乳糖的还原性与不同的试剂发生氧化还原反应，选择合适的指示剂，采用滴定的方法测得乳糖含量。但是，滴定方法有其自身的缺点：试剂配制繁琐、费时，滴定终点判断不明显，滴定条件较为苛刻。

SN/T 0871-2000《进出口乳及乳制品中乳糖的测定方法》原理是：试样中加入硫酸锌溶液和氢氧化钡溶液以沉淀蛋白质等杂质，经离心后，上层样液中的乳糖在苯酚、氢氧化钠、苦味酸和亚硫酸氢钠作用下生成桔红色的络合物，用分光光度法测定，用标准曲线法定量。该方法采用分光光度法直接测定乳粉中乳糖的含量，相对简单、快速。但是其受到分光光度计测定样品量的限制，一次测定样品量较少，而且还需要进行空白试验。

此外，高效液相色谱法虽然准确、灵敏，但费用大、难以普及。

本申请的乳粉中乳糖含量测定方法结合SN/T 0871-2000《进出口乳及乳制品中乳糖的测定方法》和自行开发的RQS1.0图像分析软件，采用SN/T 0871-2000方法的前处理，利用RQS1.0图像分析软件提取色度信息，测定乳糖含量，此方法可以一次测定多个乳粉样品，具有高度的自动化程度，简单、快速。本申请内容未见他人文章发表。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳粉中乳糖含量测定方法，该方法是根据色度学原理结合乳糖和发色剂作用生成桔红色的络合物，即不同乳糖含量的样品经沉淀蛋白质后，在苯酚、氢氧化钠、苦味酸和亚硫酸氢钠作用下生成深浅不同的桔红色络合物，其色度值与乳糖含量高低呈线性相关，用计算机软件自动分析获得样品色度值，然后计算乳糖含量。

具体步骤如下：

步骤1：配制溶液

配制乳糖标准工作液：准确称取于70℃真空烘箱中烘至恒重的适量的乳糖标准品(纯度≥99％)，加水溶解，移入容量瓶中，稀释至刻度，配成浓度为1mg/mL的标准工作液。

配制发色剂：1％～5％(v/v)苯酚溶液，3％～10％(v/v)氢氧化钠溶液，1％～5％(v/v)苦味酸溶液，1％～5％(v/v)硫酸氢钠溶液，使用时，按顺序以体积比1∶2∶2∶1配制，此发色剂置于冰箱中可使用一周。

配制沉淀剂：3％～10％(v/v)氢氧化钡溶液，3％～10％(v/v)硫酸锌溶液；

步骤2：试样处理

称取适量试样，用水溶解移入容量瓶中，稀释至刻度，配成浓度为8～12mg/mL。并准确移取定量于离心管中，加入定量试样水溶液0.8～1倍的硫酸锌溶液，0.01～0.05倍的氢氧化钡溶液，用小玻璃棒轻轻搅匀后，以约6000r/min的转速离心10min，取上层澄清液作为样液，供测定用。