[发明专利]一种用于超薄切片的样品包埋方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域中，样品的包埋方法，特别是涉及一种用于制作超薄切片的样品的包埋方法。

背景技术

电子显微镜是细胞生物学研究中的重要工具，不仅能够研究细胞的亚显微结构，而且能对各种酶、除酶以外的其它蛋白质、核酸、脂肪等生化物质以及Ca²⁺等无机离子进行精确的亚细胞定位；还能追踪细胞内生化物质的合成、分解等动态变化，应用非常广泛。电子显微镜技术中，超薄切片制作是最基本、最常用的技术。超薄切片制作过程中，对样品的包埋是关键的步骤。胡适宜和徐丽云曾提出薄层包埋法(胡适宜，徐丽云(1993)介绍一种超薄切片中细胞定位的薄层包埋方法，植物学通报，10(1)：63～64)，后来邢树平等又对这一方法进行改进(邢树平等(1999)薄层包埋法的改进，植物学通报，16(4)：468)，获得了较好的效果。但是他们的方法不能使得树脂在聚合过程中保持与外界空气隔绝，因此只适用于利用Epon812、Spurr等环氧类树脂进行包埋的情况，而免疫电镜中常用的LR White等树脂，因其聚合过程中必须隔绝氧气，目前还只能采取传统的胶囊包埋法(Scoccianti et al.(2003)Involvement of theubiquitin/proteasome pathway in the organization and polarised growth of kiwifruit pollentubes.Sex Plant Reprod 16：123-133)。而用胶囊法包埋的样品(尤其是花粉管等)，在包埋块中的排列方向不一，因此在后续的切片过程中很难精确定位特定的组织或细胞，严重影响后续的超薄切片的效率和质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单有效的用于超薄切片的样品包埋方法。

一种用于超薄切片的样品包埋方法，包括以下步骤：1)在硬质支持物上设置一可拆除的密封的槽体，所述槽体和硬质支持物之间是密封连接的；

2)一可以弯折的盖体，将其与所述槽体的顶部密封连接；其中，预留一部分尚不进行密封连接的部位，作为样品和包埋物植入口；

3)从所述样品和包埋物植入口将所需包埋的样品植入所述槽体中，再将包埋物注入，并充满所述槽体的内部空间；

4)将所述样品和包埋物植入口部分的所述盖体和所述槽体密封；

5)使注入槽体的所述包埋物固化；

6)拆除所述盖体、槽体及支持物，得到包埋了样品的固化包埋物。

在上述过程中，槽体是用胶粘结在硬质支持物上的。可以用的胶的种类是非常广泛的，只要是能够将槽体和硬质支持物粘结住即可，例如502胶等。

为了方便将固化的包埋物取出，在所述硬质支持物上可以先粘结铺设一层非透气性的隔离膜，所述槽体设置在该隔离膜上。所述用作隔离膜的材料也是非常广泛的，例如透明胶带，就是一个很好的选择。一般市售的透明胶带即可，其宽度应大于或等于硬质支持物的宽度；所述槽体是用胶粘结在隔离膜上的。

所述盖体和槽体之间是用胶粘结在一起的。可以用的胶的种类也是非常广泛的，只要是能够将槽体和盖体之间粘结住即可，例如502胶等

所述槽体和盖体的选材都是非常广泛的，只要是不透水，能够密封就可以。比如槽体可以用废电话卡剪成的薄片制作(切割成约2mm宽的小条即可)，既经济又方便。盖体可以用具有一定柔韧度的透明胶片来充当。硬质支持物可以选择载玻片或硬质塑料等平整的物品。

所述包埋物可以选择的范围是非常广泛的，一般的包埋材料均可以，例如丙烯酸树脂或环氧树脂(Epon812树脂或Spurr树脂)。特别是对于丙烯酸树脂LR White树脂尤为适用，因为该方法可以保证LR White树脂与外界空气的隔绝。

在树脂的固化过程中，根据不同的树脂要采用不同的固化条件，LR White树脂的固化温度为50-60℃，固化时间是24-48h；Spurr树脂的固化温度为55-60℃，固化时间是16-24h；Epon812树脂的固化温度为37-45-60℃，固化时间是每步12h。