[发明专利]chIFNGR1基因、其编码的蛋白质及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及鸡干扰素-γ受体α链(chIFNGR1)基因及编码的氨基酸，还涉及其胞外域重组蛋白的抗病毒活性。

背景技术

干扰素-γ(IFN-γ)主要由活化的T细胞、NK细胞产生，是一种具有抗病毒，调节免疫和促进细胞凋亡等多种生物学活性的细胞因子。其功能的多效性是通过与几乎表达在所有细胞表面、高亲和力的受体以严格的种属特异性方式结合，诱导细胞表达多种蛋白质而实现的。

IFN-γ相关的诸多生物学功能早已被人们所认识，但对于IFN-γ细胞表面受体的结构与功能的认识，只是在近十来年才取得了有意义的进展。IFN-γ受体由配体结合链(IFN-γ受体α链，即IFNGR1)和信号转导链(IFN-γ受体β链，即IFNGR2)组成。IFNGR1蛋白结构域由胞外域(ECD)、跨膜区(TM)和胞内域(CYT)组成。胞外域与配体结合，一般由200个左右的氨基酸残基组成，包含2个串连的纤连蛋白III型区(FNIII)。胞内域传递细胞内信号，含有保守的LPKS和YDKPH序列，这两个序列分别是JAK1和STAT1的结合位点。

1988年，Michel等人首先克隆了人II型干扰素受体IFNGR1的基因。1994年，Soh等人首先克隆了IFNGR2基因。目前已先后克隆出人、小鼠、大鼠和牛的IFNGR1基因，以及人、大鼠、小鼠和鸡的IFNGR2基因。其中，鸡的IFNGR2基因于2006年由本教研组的韩春来博士采用快速扩增cDNA末端(RACE)技术成功获得并发表，该基因全长cDNA序列和其中编码区在GenBank上的序列号分别为AY957508和AY820753。而鸡的IFNGR1基因在国内外未见公开报道，仅可在GenBank上查到一段计算机分析预测序列XM 419722，该序列的正确性需要进一步的实验证明。本发明填补了鸡干扰素受体研究的空白，为开发应用奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供鸡IFNGR1基因及其编码蛋白。

本发明首次获得了鸡IFNGR1的cDNA序列，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示，该序列全长2123bp，编码442个氨基酸，其序列如序列表SEQ ID No.2所示，是一种跨膜蛋白，信号肽、胞外域、跨膜区和胞内域分别由20、220、23和179个氨基酸组成。

本发明无菌采集鸡抗凝血，分离淋巴细胞提取总RNA。并根据GenBank上登录的鸡IFNGR1基因计算机预测序列及IFNGR1基因的保守序列(IFNGR1蛋白胞内域的氨基酸序列LPKS和YDKPH序列在人、牛、小鼠和大鼠都是保守的)设计引物，用RACE和PCR方法获得了chIFNGR1 cDNA序列2123bp，序列包括该基因的部分5’端非编码区、编码区和3’端非编码区。该基因编码的蛋白为鸡IFN-γ受体α链，具有结合配体，传递IFN-γ刺激信号的作用。

应当理解，考虑到密码子的简并性和将用于具体表达本发明鸡IFNFR1基因的动物或微生物的优选密码子，例如可在其编码区，在不改变氨基酸序列的条件下，或在其非编码区在不影响鸡IFNFR1表达的条件下，对SEQ ID No.1所示的序列进行修改。因此，本发明的范围还包含对SEQ ID No.1所示序列进行的替换、添加和/或缺失一个或多个核苷酸，具有与本发明基因具有相同功能的核苷酸序列。

并且，本发明还包括对表达自本发明基因的蛋白质(SEQ IDNo.2)进行各种取代、添加和/或缺失一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

此外，应当理解，本领域的技术人员还可以具体利用本发明基因的某个片段，例如下面所要说的鸡IFNGR1基因的胞外域核苷酸序列。本领域技术人员还可以利用本发明蛋白质的某个部分，如该基因的胞外域蛋白。

本发明的基因或蛋白质可来自鸡的各种活组织或通过DNA或肽合成的方法来获得。

此外，可以将本发明的基因或其片段插入到克隆载体或表达载体中，进而可以将表达载体引入适宜的宿主中表达，如大肠杆菌，酵母和动物细胞等，从而可以进行大规模的生产本发明的DNA或蛋白质。上述得到的克隆载体或表达载体，以及含有所述表达载体的宿主，均属于本发明的范围。

本发明的另一个目的在于提供具有抗病毒活性的鸡IFNGR1胞外域重组蛋白。