[发明专利]甘草高效抗菌、抗氧化活性部位的分离及鉴定

说明书

技术领域

本发明涉及一种简便、快速分离植物高效抗菌、抗氧化活性部位的工艺及质量标准检测方法，属于中药制备及鉴定技术领域。

背景技术

在天然药物的制备中，快速高效地提取、分离并鉴定目标生物活性部位的工艺及方法创新最为人们关注。更为需要的是如何生产并鉴定出已知生物活性的多种化合物是否有一致性。

甘草是多年生草本植物，是一种应用极其广泛的中药材，其味甘、平，能补脾益气、止咳化痰、缓急止痛、解毒降火等。这些功能与甘草中所含的黄酮类、三萜类、多糖类等有效活性成分相关。从甘草中提取的抗氧化成分具有较强的清除自由基的作用，还具有抑菌、消炎、解毒、除臭的功能，如何针对性地分离提取甘草中具有抗氧化、抗菌生物活性部位，并对它们进行质量标准鉴定，目前还没有一种简便、快速的有效方法。

发明内容

本发明的一个目的在于提供了一种简便、快速分离甘草高效抗菌、抗氧化活性部位的方法，并对所得到的活性部位进行质量标准鉴定。

本发明分离甘草有效部位并对其进行鉴定的方法包括如下步骤：

1)以≥95％的乙醇或甲醇，或者是其它具有相似极性的有机溶剂或它们的混合物作为

溶媒，于10～100℃超声提取甘草材料10～30min；

2)过滤，浓缩滤液；

3)滤液直接干燥成粗品或者用石油醚提取后过滤、浓缩、干燥得到不同的活性部位；

4)粗品选用不同极性的有机溶剂作为溶媒进一步精化分离出不同的活性部位；

5)通过抗菌、抗氧化试验评价这些不同活性部位的功能效果；

6)通过质谱指纹鉴定，根据其功能确定这些不同活性部位所含化学基团是否具有一致性；

7)通过HPLC指纹图谱对照，结合其功能效果对比确定这些不同活性部位中相关功能化合物的相对含量。

在上述方法的步骤1)之前可先用水提取经粉碎的甘草材料，然后过滤取甘草渣进行超声提取。在步骤1)中可利用超声纳米吸附提取工艺提高分离高效抗氧化、抗菌活性部位的产率，即在超声提取过程中加入纳米材料，让超声细胞破碎提取与纳米吸附同时进行。纳米材料优选纳米级SiO₂，粒度小于1000nm，或相似硬度、表面积、粒度的其他纳米材料。纳米材料用量与被提取植物原料比大于等于0.01％(重量比)，最佳用量为非水溶性目标成分的相同量。

在本发明的一个具体实施例中，上述步骤3)～4)滤液直接干燥制得粗品G007，再选用不同极性的有机溶剂作为溶媒进一步精化分离出不同的活性部位，如：制备G017选择的溶媒为乙酸乙酯，或相似极性的溶媒；制备G716选择的溶媒为石油醚-乙酸乙酯，或相似极性的溶媒；制备G717选择的溶媒为石油醚或相似极性的溶媒。

用上述工艺制备的具有高效抗氧化、抗菌生物活性的提取物G007、G017、G716及G717具有特定可测的化学特征。

在步骤5)通过抗油脂氧化试验来确定这些不同活性部位的抗氧化效果；通过不同活性部位的最低抑菌浓度评价其抑菌效果：选定检测菌如变形链球菌(Streptocacusmutans)、粘性放线菌(Actinomyces viscosus)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)，对上述活性组分的最低抑菌浓度(MIC)进行评价，按最低抑菌浓度分离高效抗菌部位如下(参见表I)：

G007MIC≤150ppm

G717，G017 MIC≤100ppm

G716MIC≤10ppm

通过质谱指纹鉴定，确定高效抗菌抗氧化提取物的主要化学基团，如根据上述抑菌的功能，确定使之功能体现的化学基团(G017的质谱指纹图如图2所示，G716的质谱指纹图如图3所示)。通过HPLC的指纹鉴定，确定相关化合物的相对含量(G007和G017的HPLC指纹图谱比较如图4所示)。

本发明提供了一种简便、高效率提取、分离植物高效抗氧化抗菌活性部位的工艺及质量标准鉴定方法，该工艺及方法可延伸到其他中药的提取与制备。其中，采用超声波提取(ultrasonic extraction)的机械效应、空化效应、热效应的优势，结合纳米材料的吸附，超声波同时增大纳米颗粒及介质分子的运动速度，增强介质的穿透力以达到从动植物种高效提取目标活性成分或部位的目的。通过质谱和HPLC指纹图谱鉴定已知生物活性的多种活性部位，可简便有效地确定其所含化合物是否有一致性及其相对含量。

附图说明

图1是从甘草中提取分离高效抗氧化、抗菌活性部位的工艺流程图。