[发明专利]固定化肠膜状明串珠菌生产粗右旋糖酐的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固定化肠膜状明串珠菌生产粗右旋糖酐的方法。

背景技术

右旋糖酐是一种经微生物发酵产生的多糖，作为一种抗休克和改善人体微循环的药物已在临床得到了广泛的应用，是目前公认的优良血浆代用品，同时又可作为添加剂应用于轻工、食品、化工等领域。

目前工业上都是采用游离细胞一肠膜状明串珠菌进行发酵生产右旋糖酐，经水解、划分、干燥等工序，最后形成小分子、中分子和低分子产品。它存在生产成本高、菌体活性不高等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种生产成本低、菌体活性高的固定化肠膜状明串珠菌生产右旋糖酐的方法。

本发明固定化肠膜状明串珠菌生产粗右旋糖酐的方法包括下列步骤：

a)、混合    取浓度为8％的聚乙烯醇复合凝胶90mL，在室温下与6～15ml的肠膜状明串珠菌菌液混合，搅拌均匀，倒入平皿中，厚度为4～10mm；

b)、冷冻、切块    在-24℃的条件下冷冻48小时，待成型后取出自然解冻，切成8mm×8mm×8mm的小块；

c)、发酵生产    按照重量百分含量为8％～15％的载体添加量将固定化肠膜状明串珠菌加入到生产培养基中，在25℃条件下进行粗右旋糖酐发酵生产。

固定化肠膜状明串珠菌载体添加量为10％。

本发明采用固定化细胞技术对肠膜状明串珠菌进行固定化后，利用固定化增殖细胞可直接进行右旋糖酐的发酵生产，不但可减少操作工序，有效的提高菌体活性，还可在一定程度上降低生产成本。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1    固定化细胞的载体——聚乙烯醇(PVA)复合凝胶的合成方法如下将9克聚乙烯醇缓慢溶解到100毫升85℃～95℃的热水中，边加边搅拌，待聚乙烯醇完全溶解后，加入4毫升的丙三醇，搅拌均匀，然后在不断搅拌的同时加入已溶解好的1克的硼砂(用1∶1的热水溶解)，边加边搅拌，进行凝胶化处理，交联时间为2～15分钟，然后缓慢地加入1克的顺丁烯二酸酐(用1∶1的热水溶解)，不断搅拌，直至凝胶溶液中无絮状凝固物为止，所得透明、略带乳白色的粘稠溶胶，即为聚乙烯醇复合凝胶。

取浓度为8％的聚乙烯醇复合凝胶90mL，在室温下与10mL肠膜状明串珠菌菌液混合，搅拌均匀，倒入平皿中，厚度为4～10mm，在-24℃的条件下冷冻48小时，待成型后取出自然解冻，切成8mm×8mm×8mm的小块。

按照10％的载体添加量将固定化肠膜状明串珠菌加入到生产培养基中，在25℃条件下进行右旋糖酐发酵生产。

粗右旋糖酐含量测定：取100mL发酵液，加入适量95％(V/V)的乙醇，进行沉淀，用手捏洗干净后，称湿重。

结果显示：粗右旋糖酐小样14.3g/100mL。

实施例2    重复实施例1，有以下不同点：按照8％的载体添加量将固定化肠膜状明串珠菌加入到生产培养基中，在25℃条件下进行右旋糖酐发酵生产。在实施例1中同样条件下测定，结果显示：载体添加量为8％时，粗右旋糖酐小样较实施例1试验低。

实施例3    重复实施例1，有以下不同点：按照12％的载体添加量将固定化肠膜状明串珠菌加入到生产培养基中，在25℃条件下进行右旋糖酐发酵生产。在实施例1中同样条件下测定，结果显示：载体添加量为12％时，粗右旋糖酐小样收率与实施例1试验相当。

实施例4    重复实施例1，有以下不同点：按照15％的载体添加量将固定化肠膜状明串珠菌加入到生产培养基中，在25℃条件下进行右旋糖酐发酵生产。在实施例1中同样条件下测定，结果显示：载体添加量为15％时，粗右旋糖酐小样收率与实施例1试验相当。

对比例A    重复实施例1，有以下不同点：用浓度为8％聚乙烯醇复合凝胶50mL与6mL、10mL和15mL的肠膜状明串珠菌菌液混合。在实施例1中同样条件下测定，结果显示：包埋量为6mL的固定化肠膜状明串珠菌的粗右旋糖酐小样较实施例1试验低，10mL和15mL固定化肠膜状明串珠菌的粗右旋糖酐小样较实施例1试验高。

通过本发明实施例与对比例的比较，说明利用聚乙烯醇复合凝胶固定化肠膜状明串珠菌有较好的机械性能、操作稳定性和工业应用前景。