[发明专利]抗丙型肝炎病毒抗体及其用途

说明书

本申请是1999年7月20日提交的申请号为99808641.X(PCT/EP 99/05173)，名为“抗丙型肝炎病毒抗体及其用途”的发明专利申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及能特异性结合丙型肝炎病毒(HCV)糖蛋白E2的构象依赖性表位的人抗体，及其各种用途。

在本说明书中引用了数篇文献。各篇文献在此引入以供参考(包括制造厂商说明书、指南等)；然而，并不认为所引用的任何文献确实是本发明的现有技术。

发明背景

丙型肝炎病毒(HCV)是非甲非乙型肝炎的主要病原体。已估计献血者人群中的HCV感染流行率在0.4到2％范围内(Choo等，1989)。在70％以上的病人中，急性HCV感染引起慢性肝炎的产生，它能向肝硬化和肝细胞癌演化(Saito等，1990)。HCV是一种具有包膜的、正链RNA病毒，归类于黄病毒科(Francki等，1991，Miller等，1990)。它含有约9,500nts的基因组，编码3010到3033个氨基酸的一种多蛋白。宿主和病毒蛋白酶对该多蛋白的加工导致产生结构蛋白和非结构(NS)蛋白(Rice等，1996)。结构蛋白包括核衣壳和两个推定的病毒粒子包膜糖蛋白E1和E2(Miyamura等，1993)。非结构蛋白包括NS2到NS5抗原。

在一些人中，急性感染成功的缓解，表明HCV可被宿主免疫系统控制。宿主克服HCV感染的机制仍然未知。以前的报道强烈提示，人和黑猩猩能产生病毒中和性抗体(Choo等，1994，Farci等，1994，1996，Shimizu等，1994)。在用重组E1和E2蛋白免疫接种后，已成功实现了体内的保护黑猩猩防止被同源HCV分离物初次感染(Choo等，1994)。在该研究中，只有那些显示抗E2抗体高滴度的黑猩猩受到了保护。虽然未鉴定出未识别中和抗原结构域，但推测免疫原的构象对中和性抗体的诱导是关键的。

由于到目前为止，尚无培养病毒和开发中和试验的有效体外复制系统，因此正在积极寻找评估抗-E1/E2抗体的生物学功能的其它试验。已在初步的研究中描述了对病毒附着于推测的易感细胞上的预防方法(Shimizu等，1994，Zibert等，1995)。更近的，已开发了一种“体外”中和结合(NOB)的试验，其利用了高度纯化的E2蛋白与易感性靶细胞的特异性结合(Rosa等，1996)。该试验使得能定量评价能中和E2与这些细胞的结合的NOB抗体。用该系统，Rosa等已显示，只有用E1和E2蛋白免疫，产生抗-NOB高滴度的黑猩猩才受到保护，对抗攻击性感染(Rosa等，1996)，提示NOB活性可能是“体内”病毒感染被中和的一种指标。在HIV感染中，一种类似的模式最近已显示，抗体与包膜糖蛋白寡聚物结合的亲和力是病毒中和的良好预告(Fouts等，1997)。另一种评估抗-E1和/或抗-E2抗体的生物学活性的方法包括，测试这些抗体识别据信存在于病毒颗粒表面的天然结构的能力。体外研究已显示，E1和E2相互反应，形成非共价连接的复合物(Deleersnyder等，1997，Ralston等，1993)。已提出这些复合物代表HCV病毒颗粒的功能性亚基(Deleersnyder等，1997，Dubuisson等，1994，Dubuisson和Rice，1996，Ralston等，1993)。对病毒感染中B细胞所有组成成分的探测，对于理解与这些感染有关的病理是关键的。人单克隆抗体提供了另一种方法。对于HCV，仅报道了对有限数目的病毒抗原的这类抗体的分离和特性分析。这些包括核衣壳、NS3和NS4蛋白质(Akatsuka等，1993，Cerino等，1991，1993，Chan等，1996，Mondelli等，1994)和最近的是糖蛋白E2(Chan等，1996)。对于后一种情况，作者使用了噬菌体展示技术，与合成肽的使用结合，来筛选抗-E2免疫反应性，并能获得特异性IgG单链Fvs，其识别E2序列。虽然鉴定到了一种特异性线性表位序列，但未描述过该抗-E2抗体的生物学活性，并且该抗体在控制感染进程中的推定作用仍然未限定。最近，WO97/40176描述了从一组合文库中获得的免疫球蛋白分子，其能特异性与HCV E2抗原结合。虽然显示这些免疫球蛋白的Fab片段在中和结合试验中具有结合活性，但发现重组表达的Fab克隆和对应的完整IgG分子在中和HCV E2多肽的结合中是无效的。

发明简述