[发明专利]HIV调节/辅助蛋白的融合蛋白

说明书

此案是申请日为2003年05月14日、中国申请号为03811119.5、 发明名称为“HIV调节/辅助蛋白的融合蛋白”的发明申请的分案申请。

本发明涉及一种融合蛋白，所述蛋白包含选自Vif，Vpr，Vpu，Vpx，Rev， Tat和Nef中的至少四种HIV蛋白的氨基酸序列或者一种或多种所述蛋白的 氨基酸序列的衍生物，其中所述融合蛋白不被加工成单独的具有天然N和 C末端的HIV蛋白。本发明还涉及编码所述蛋白的核酸，包含所述核酸的 载体，以及制备所述蛋白的方法。所述融合蛋白，核酸和载体可用作至少 部分预防HIV感染的疫苗。

背景技术

人免疫缺陷病毒(HIV)是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的致病因子。像 所有的逆转录病毒一样，该病毒的基因组编码Gag，Pol和Env蛋白。此外， 该病毒的基因组还编码调节蛋白，即Tat和Rev，以及辅助蛋白，即Vpr，Vpx， Vpu，Vif和Nef。

尽管公共卫生组织努力控制AIDS流行病的播散，新发感染的数目仍在 增长。世界卫生组织估计2000年末，全球感染的人数达3.61千万，比根据 十年前的数据预计的数目高50％(WHO&UNAIDS，UNAIDS，2000)。从全球 来看，2000年新发HIV感染的数目在530万。

由于该流行病的持续传播，临床上仍需要有效的疫苗。现已发展出一 些不同的HIV-1疫苗递送策略例如新的载体或者辅剂系统，并在不同的前 临床背景和临床试验中进行了评估。进入III期临床实验的第一种候选疫苗 是以明矾中的包膜gp120蛋白(Francis等，AIDS Res.Hum.Retroviruses 1998； 14(Suppl 3)(5)：S325-31))为基础的。尽管该疫苗在较早的II期实验中不是 很成功，其III期实验还是已经开始了。

多年来基于包膜抗原对预防性疫苗投入努力之后，最近更多的努力集 中在将调节蛋白例如Tat，Nef和Rev用作候选疫苗抗原上。这些调节性抗原 在治疗中已经使用了几年(Miller等，Nature Medicine 1997，3，389-94， Calarota等，Lancet 1998，351，1320-5，Ayyavoo等，AIDS，2000，14，1-9)。近 来，在小型临床前实验中对预防性疫苗的研究显示，这些抗原的应用很有 前途。使用Tat和Rev，或单独的Tat作为候选的预防性疫苗显示可控制 SIVmac(Osterhaus等，Vaccine 1999，17，2713-4)。此外，还表明针对该病毒早 期调节蛋白的CTL对于在该病毒产生高水平的成熟病毒粒前消除感染的细 胞很重要(van Baalen等，J.Gen.Virol 1997，78，1913-8；Addo等，PNAS， 2001，98，1781-6)。

尽管HIV的调节/辅助蛋白诱导有效的免疫应答，但如果不是全部也是 大多数都有严重的副作用，从而限制了它们作为疫苗的用途：Nef，Tat和Vpu 已显示在下调CD4+和/或MHC I类分子的表达中起作用(Howcroft等， Science，1993，260，1320-2；Schwartz等，Nature Med.1996，2，338-42；Swann 等，Virology，2001，282，267-77；Janvier等，J.Virol.，2001，78，3971-6， Weissmann等，PNAS 1998，95，11601-6)。已知Tat介导体内的急性免疫抑制 (Cohen等，PNAS，1999，96，10842-10847)。还描述了Vpr的免疫抑制作用 (Ayyavoo等，Nature Med.，1997，3：1117-1123)。已经描述了Vpr和Vpx在酵 母细胞中具有不同的细胞抑制和细胞毒性效果(Zhang等，Virology，1997， 230，103-12)。因此，HIV的大多数辅助/调节蛋白似乎具有疫苗配方中不期 望的功能特性。