[发明专利]用于细胞培养的无动物蛋白质培养基

说明书

本申请为2005年3月8日提交的03821326.5号中国专利申请的 分案申请。

                      发明领域

本发明涉及包含大豆水解产物和酵母水解产物的组合物的无动 物蛋白质细胞培养基。本发明也涉及无动物蛋白质培养方法，其中可 在不含动物蛋白质的条件下培养、增殖和传代细胞。这些方法在培养 细胞，如重组细胞或用病毒感染的细胞中是有用的，且可用于生产经 过细胞培养所得的生物制品。

                      发明背景

对于细胞的培养，特别是真核细胞，更特别是哺乳动物细胞，常 需要使用特殊的培养基，该培养基提供营养物质和为细胞有效生长和 生产目的蛋白质或病毒所必需的生长营养物质。细胞培养基配方已经 补充有大量的添加物，包括不确定的组分，如胎牛血清(FCS)、几 种动物来源的蛋白质和/或牛来源的蛋白质水解产物。

一般而言，血清或血清来源的物质，如清蛋白、转铁蛋白或胰岛 素，可能含有会污染培养物和由培养物获得的生物制品的多余的介 质。此外，必须检测人血清来源的添加物的所有已知的病毒，包括能 通过血清传递的肝炎和HIV。而且，牛血清和牛血清来源的产物，例 如胰蛋白酶，有承受BSE污染的危险。另外，所有血清来源的产物可 能被未知的介质污染。细胞培养中，在来源于人或其它动物源的血清 或蛋白质添加物的情况下，特别是如果细胞用于生产施用于人的药剂 或疫苗存在许多问题(例如，不同批次的质量和成分变化，以及存在 受支原体、病毒或BSE因子污染的危险)。

因此，为提供有效的宿主系统和不需要血清或其它动物蛋白质化 合物的培养条件，已经做了许多尝试。简单的无血清培养基一般包括 基础培养基、维生素、氨基酸、有机和无机盐，以及使培养基变为营 养复杂化的可能的附加成分。然而，这种培养基经常是营养不足的， 且必须补充动物来源的蛋白质补充物或用于细胞培养的重组的蛋白 质如胰岛素、胰岛素样生长因子或其它生长因子。

为避免在无血清细胞培养基中使用动物蛋白质补充物，已经做了 几种尝试以提供完全没有蛋白质的细胞培养基。

Cinatl等人，Cell Biology International 17：885-895(1993) 公开了一种特别用于在聚乙烯醇缩甲醛(PVF)培养表面上使VERO细 胞连续增殖的培养基(PFK-1)的开发。

WO 96/15231公开了由合成的极限必需培养基和酵母提取物组成 的无血清培养基用于增殖脊椎动物细胞和病毒的生产方法。

在WO 98/15614中公开了一种由包含水稻肽和酵母提取物或酶解 产物的基础细胞培养基，和/或植物脂质组成的培养基配方用于动物 细胞的生长。

在WO 01/23527中公开了一种包含纯化的大豆水解产物的培养基 用于培养重组细胞。

WO 00/03000公开了一种包含大豆水解产物和酵母提取物的培养 基，但也需要存在重组形式的动物蛋白质，如生长因子。

为有效生产生物制品，如病毒或重组蛋白质，达到最佳的细胞密 度以获得最大的产物产量是重要的。

因此，目前的需求在于增加细胞的生长、代谢活性和密度，以及 提供完全没有动物蛋白质的理想的细胞培养基用于生产生物制品，如 用作人的药物或疫苗。此外，如果培养基中不存在动物蛋白质，则下 游加工，例如来自培养基中的所需产物的纯化可以是更加经济和省时 的。另外，实施本发明可避免不必要的免疫原性动物蛋白质可能诱导 的有害免疫学反应。

                      发明概述