[发明专利]一种重组牛O型口蹄疫病毒融合蛋白疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及基因工程重组蛋白疫苗，特别是涉及一种预防动物口蹄疫病毒感染的重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗及其制备方法。

背景技术

口蹄疫(Foot and mouth disease，FMD)是一种主要发生于野生和家养的牛，羊，猪等偶蹄类动物的急性全身性的高度传染性的疾病，口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)是引起该病的病原体。FMDV传播方式主要包括消化道、呼吸道、皮肤和粘膜。动物的感染率几乎达100％，动物感染后体温升高到40～41℃，状态低迷。1～2天后，口腔出现水泡，同时或稍后，趾间、蹄冠的柔软皮肤上也发生水泡。动物在患病期间肉和奶的生产停止、病后肉和奶产量长期减少以及种用价值丧失也可造成较大的损失。由于FMDV对相关农、畜牧业有较大的经济影响，预防和治疗口蹄疫一直是全球关注的问题。

口蹄疫病毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae)口疮病毒属(Aphthovirus)，是偶蹄类动物高度传染性疾病口蹄疫的病原体。口蹄疫病毒包括七个血清型：A型、O型、C型、Asia 1、SAT1、SAT2、SAT3，各血清型之间基因组高度变异并且无交叉反应(Margarita Sáiz，et al.2002)。

FMDV感染动物后，主要激发特异性的体液免疫应答。体液免疫保护机体免于同类抗原的再感染(J.S.Sallt，1993)。血清中中和抗体的水平与保护作用密切相关。感染或免疫FMDV后很快就可以检测出血清中的中和抗体。感染初期(3-4天)IgM首先提高，随后IgG开始提高，是感染后2周内主要的中和抗体(MargaritaSáiz，et al.2002)。FMDV的感染或免疫也可以激发T细胞的免疫反应。猪和牛的体内实验都证明：B细胞激活和抗体的产生常常伴随着CD4+T细胞介导的淋巴增生，这些辅助性的T细胞可以识别FMDV结构蛋白或非结构蛋白上的免疫表位，也是针对FMDV的保护性免疫必不可少的成分，起到促进中和抗体的分泌、调整免疫反应微环境的作用。同时，FMDV的感染也介导了感染细胞表面MHCI类分子的表达，影响FMDV感染细胞表面病毒抗原肽向CTLs的提呈，从而使病毒逃脱宿主的CTL细胞杀伤(F.Sobrino，2001)。

目前应用的FMDV疫苗主要是灭活疫苗和弱毒疫苗。弱毒疫苗采用弱化病毒的方式，将母毒通过在豚鼠，鸡胚或者细胞种经过多代的培养弱化，使病毒逐渐发生基因突变，产生弱毒毒株。弱毒毒株在组织培养物中经过大量扩增后，加入佐剂等制成疫苗。FMD弱毒疫苗在进行免疫预防的过程中，能产生一定水平的保护，对FMD的流行有一定的控制作用。但是由于弱毒疫苗是活病毒，在预防接种的过程中可能造成动物携带病毒的状态，在易感动物体内长期存活的过程中，弱毒的FMDV毒株很有可能恢复减弱了的毒力。同时，弱毒病毒在易感动物体内的增殖也会对产生的保护免疫有抑制的作用，不能达到最佳的免疫效果。因此，弱毒疫苗的应用受到了限制。灭活疫苗是大量扩增病毒后，经过化学灭活处理，添加佐剂后制备的疫苗产品。FMDV灭活疫苗的免疫原性较好，由于制备过程中强毒的使用和病毒灭活不完全的可能性，潜在的不安全性影响其使用。所以，为了克服弱毒疫苗和灭活疫苗在安全上的隐患，迫切寻找一种安全有效的新的FMDV疫苗。

重组口蹄疫病毒蛋白疫苗是采用基因克隆的手段将口蹄疫病毒的抗原编码基因进行克隆、重组、表达制备出的重组蛋白。由于重组蛋白疫苗只含有病原体的一部分，不会引起动物发病，在安全性方面有很大提高。另外，可以根据需要制备同一病毒多个成分或多价病毒疫苗。因此，重组口蹄疫病毒蛋白疫苗有广阔的应用前景。

发明内容

本发明提供的应用基因工程技术在大肠杆菌中生产的一种重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗，对O型口蹄疫病毒感染有防治作用。

本发明中，应用重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗免疫豚鼠和牛，免疫后获得的血清在乳鼠中和实验中，具有良好的中和O型口蹄疫病毒的作用。

本发明提供的重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗在生产方式上区别于传统灭活口蹄疫病毒疫苗，且在安全性上具有传统灭活口蹄疫病毒疫苗无法比拟的优势。

本发明还涉及该重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗在制备用于防治动物口蹄疫病毒感染的生物制品中的用途以及含有该基因工程重组蛋白的疫苗制品。

本发明还涉及该重组口蹄疫病毒融合蛋白疫苗的施用对象、施用方法、药物学载体和施用剂量。

本发明中术语的含义