[发明专利]从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法

权利要求书

1.一种从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：

制备步骤1、先将茶鲜叶萎凋5～12小时，进行滚筒杀青处理，然后在80～120℃条件下干燥，经粉碎机制成颗粒大小为60～80目的茶粉；

制备步骤2、用茶粉和60～80％乙醇溶液同时置于提取罐中进行固液萃取，萃取温度为70～90℃，时间为30～120分钟，料液比为1∶3～1∶10，过滤，滤渣反复萃取2～5次；

制备步骤3、合并所有萃取液后进行浓缩，浓缩液和石油醚溶液按体积比1∶1～1∶2混合后，进行液液萃取，时间为5～30分钟，反复操作2～5次；

制备步骤4、将所得萃余液再与乙酸乙酯按体积比为1∶1～1∶2混合，进行液液萃取，时间为5～30分钟，反复操作2～5次，所得萃取液过滤、浓缩，得浓缩液，浓缩液在60～100℃条件下干燥，得甲基化儿茶素粗提物干粉A；

制备步骤5、用经预处理过的20～50目粗聚酰胺树脂装进层析柱，将甲基化儿茶素粗提物干粉A与粗聚酰胺树脂按重量比1∶1～3.5∶1充分混匀，装入层析柱，然后用20～95％的乙醇洗脱，流速为0.5～1BV/h，收集洗脱液，浓缩，在60～100℃条件下干燥得甲基化儿茶素粗提物干粉B；

制备步骤6、用经预处理过的60～200目细聚酰胺树脂装进层析柱，将甲基化儿茶素粗提物干粉B与细聚酰胺树脂按重量比1∶1～3.5∶1充分混匀，装入层析柱，用甲醇和三氯甲烷按体积比为1∶1～4∶1的洗脱液进行洗脱，流速为0.1～0.5BV/h，收集洗脱液，浓缩，在60～100℃条件下干燥，得甲基化儿茶素粗品；

制备步骤7、用水和甲醇按体积比7∶2～5∶2混合，配置混合液A，用乙酸乙酯和正己烷按体积比6∶1～10∶1，配制混合液B，将混合液A和混合液B均匀混合，充分饱和后，静置6～12h，取上相作为固定相，下相作为流动相；将甲基化儿茶素粗品，用流动相配制成0.5～2mg/mL的溶液M，将固定相推进逆流色谱的螺旋管柱中，调节转速为正转600～800r/min，以1～2mL/min的流速将流动相泵入，待机器稳定后将溶液M注入逆流色谱，用分布收集器进行收集，将所有含有甲基化儿茶素的收集液合并、浓缩后，浓缩液在60～100℃条件下干燥，得甲基化儿茶素纯品；

所述制备步骤3、制备步骤4、制备步骤5、制备步骤6和制备步骤7的浓缩条件是温度为20～65℃，负压为0.06～0.1MPa。

2.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述粗聚酰胺树脂树脂和细聚酰胺树脂树脂的预处理方法如下：

步骤1、乙醇浸泡：将树脂浸泡在90～95％的乙醇中，不时搅拌，使树脂和乙醇充分的接触、溶胀，一般为24h。以便从中赶出空气并对树脂进行浮选；

步骤2、乙醇冲洗：将浸泡了24h后的树脂湿法上柱，再用90～95％的乙醇冲洗，直至流出液清亮无混浊，蒸干无残留物为止；

步骤3、3％的氢氧化钠冲洗：以2BV、3％的氢氧化钠冲洗树脂，并浸泡4h，然后用蒸馏水冲洗至中性；

步骤4、5％的柠檬酸冲洗：以2BV、5％的柠檬酸冲洗树脂，并浸泡4小时，然后用蒸馏水冲洗至中性。

3.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述制备步骤5中通过以下方法使儿茶素粗提物干粉A与粗聚酰胺树脂充分混匀：先将儿茶素粗提物干粉A全部溶于甲醇制成溶液，在80～100℃加热条件下，边加入溶液，边搅拌粗聚酰胺树脂直到儿茶素粗提物干粉A与粗聚酰胺树脂充分混匀。

4.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述制备步骤6中通过以下方法使儿茶素粗提物干粉B与细聚酰胺树脂充分混匀：先将儿茶素粗提物干粉B全部溶于甲醇制成溶液，在80～100℃加热条件下，边加入溶液，边搅拌粗聚酰胺树脂直到儿茶素粗提物干粉B与细聚酰胺树脂充分混匀。

5.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述制备步骤2的过滤采用80～200目的滤网进行负压抽滤或离心过滤。

6.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述制备步骤5和制备步骤6中的层析柱为中压层析柱，该层析柱的柱长30～100cm，柱直径5～100cm，柱压0.1～5MPa。

7.按照权利要求1所述的从茶叶中制备甲基化儿茶素的工艺方法，其特征在于：所述制备步骤7中，固定相以9.99ml/min的流速泵入管路中，甲基化儿茶素粗品溶于流动相后，然后超声溶解均匀、过滤即得溶液M；由首端向尾端洗脱，然后泵入流动相进行洗脱，当流动相流出色谱分离柱时，调整紫外检测器零点，并在254nm下连续检测，记录仪同步记录，用自动部分收集器收集下相洗脱液，根据谱峰收集样品。