[发明专利]乳中农药残留的快速检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种农药残留的快速检测方法，尤其是涉及一种动物乳与乳制品中农药残留的快速检测方法。

背景技术：

在食品安全日益关注的今天，严格控制产品质量，避免由于药物残留对食品的影响，成为质量控制的关注焦点。然而农药做为食品的重要污染源，由于它的大多数品种用于防治农业有害生物，所以对人体有较大毒害性。进入人体的农药，如果超过了正常人的最大耐受限量，将会导致机体的正常生理功能的失调，引起病理改变和毒性危害，因此食品中农药残留问题也应该得到足够的重视。

在我国乳制品消费量日益增长的趋势下，严格控制乳制品(奶)的质量，对整个乳制品质量安全起到关键的作用。因此，寻找一种灵敏度较好的动物乳中农药残留的快速检测方法对于企业的食品安全性有着重要的意义。

目前，在农药残留快速检测方法的开发中，酶抑制法是研究最多且相对成熟的一种。由于有机磷与氨基甲酸酯化合物为神经系统乙酰胆碱脂酶的不可逆抑制剂，对人具有较高的毒性，酶抑制法是对部分农药进行残留快速检测的技术。有机磷、氨基甲酸酯类农药在总农药用量中占很大比重。有超过100种的有机磷农药在世界范围内应用，中国常用的农药中，甲胺磷、久效磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、氧乐果等高毒农药占总农药用量的一半以上。因此，酶抑制法的农药残留快速测定的应用有极大的现实意义。依据酶抑制设计的农药残留速测技术都是应用于水果蔬菜的农药残留测定，目前还没有应用于基质相对复杂的牛乳中，在此，我们将这些方法开发应用于牛乳的农药残留测定。

发明内容

本发明提供一种乳制品检测领域的一种新方法，具体为乳制品中农药残留的快速检测方法-酶抑制率法，该方法的原理为：以碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)为底物，二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂，使样品的提取液与胆碱酯酶作用，经一定时间反应后，根据产生黄色物质的程度，利用酶标仪在420-430nm波长下比色，优选在425nm波长下比色。由吸光值的变化计算胆碱酯酶的抑制率，从而判断有机磷和氨基甲酸酯类农药残留情况。

本发明的检测方法包括如下步骤：

1).取检验样品与丙酮混合，振摇，静置10-30分钟，出现上清液即可；在该步骤中，检验样品与丙酮二者之间的比例没有特定的限制，本领域普通技术人员可根据检测限来调整二者之间的比例；

2).取5-10ml上清液(视上清液析出情况可适当调整取样量)置于比色管中，通入氮气，浓缩至没有溶剂即可；

3).给上述比色管中加入2-4mL pH＝7.0-8.0的缓冲液，再加入40-60μL胆碱酯酶+40-60μL显色剂二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)，优选分别加入50μL的上述酶和显色剂；同时做除不加样品外其它处理步骤均与检样组相同的对照组；

4).置于37℃恒温培养箱中，培养10-30分钟，优选培养30分钟；

5).从恒温培养箱中取出培养物，加入40-60μL碘化硫代乙酰胆碱(ATCI、底物)，优选加入50μL该底物；

6).振摇反应，然后移入酶标板或比色皿中，在420-430nm波长下，应用酶标仪或分光光度计测定吸光度，优选在425nm下检测；

7).由吸光度值的变化计算胆碱酯酶的抑制率

其中：

对照组吸光度差为对照溶液反应3分钟吸光度的变化值；

样本吸光度差为样品溶液反应3分钟吸光度的变化值；

8)结果判定：

结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。

当检测样品对酶的抑制率≥50％时，表示样品为阳性

在本发明的检测方法中，可使用的缓冲液为优选pH＝8.0的磷酸盐缓冲液。

在本发明的检测方法中，样品提取采用的丙酮优选为分析纯的。

在本发明的检测方法中，可采用本领域已知的常规仪器设备，例如，可选用如下仪器设备：

移液枪，50μL-200μL；酶标仪(美国Thermo MK3)；打印机(Star HL-10)；10μL、100μL、250μL微量进样器；全温气候箱(MLR-350H)；生化培养箱(LRH-250-II微电脑控制广东省医疗器械厂)；空白酶标板；10mL比色管。

本发明的检测方法，优选地对如下农药的检测灵敏度相对较高：Dichlorvos(敌敌畏)；Methamidophos(甲胺磷)；Monocrotophos(久效磷)；Methidathion(杀扑磷)。上述几种农药标准样品都购于美国ChemService公司。