[发明专利]一种新型烟叶发酵酶制剂生产方法

权利要求书

1. 一种用于烟叶发酵的专用复合酶制剂，该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶五类酶组成，其各组分的酶活比为：葡萄糖氧化酶12354，叶绿素氧化酶368，类胡萝卜素氧化酶231，蛋白酶36310，烟碱降解酶186；其制备方法如下：选取新鲜烟叶，组织匀浆，酶群经两次(NH₄)₂SO₄分级沉淀纯化后得到粗酶液；该粗酶液用含0.1％EDTA的缓冲液进行酶金属离子螯合，螯合条件pH8.0，1-5℃，螯合时间10-20min；然后用0.3％Ca(NO₃)₂·4H₂O和MgSO₄进行离子置换，置换条件按粗酶液∶置换溶液1∶0.001体积比反应，1-5℃，置换时间8-12hr或过夜，完成酶分子修饰；经修饰的酶分子，于1-5℃条件下用0.01％蔗糖低聚物进行二次修饰保护，反应时间至少10hr以上；经过这样处理，即可获得所述的用于烟叶发酵的耐高温专用复合酶制剂。

2. 权利要求1所述的复合酶制剂的生产方法，其特征在于：该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶五类酶组成，其各组分的酶活比为：葡萄糖氧化酶12354，叶绿素氧化酶368，类胡萝卜素氧化酶231，蛋白酶36310，烟碱降解酶186；其制备方法如下：选取新鲜烟叶，组织匀浆，酶群经两次(NH₄)₂SO₄分级沉淀纯化后得到粗酶液；将该粗酶液用含0.1％EDTA的缓冲液进行酶金属离子螯合，螯合条件pH8.0，1-5℃，螯合时间10-20min；；然后用0.3％Ca(NO₃)₂·4H₂O和MgSO₄进行离子置换，置换条件按粗酶液∶置换溶液1∶0.001体积比反应，1-5℃，置换时间8-12hr或过夜，完成酶分子修饰；经修饰的酶分子，于1-5℃条件下用0.01％蔗糖低聚物进行二次修饰保护，反应时间至少10hr以上；经过这样处理，即可获得所述的用于烟叶发酵的耐高温专用复合酶制剂。

3. 权利要求1所述复合酶制剂的使用方法是，成品酶制剂在用蒸馏水稀释为0.4％后，在烟叶打叶复烤前进行二润时均匀喷施，用量200ml/50kg烟叶。

4. 权利要求1所述复合酶制剂的用途，其特征是，将权利要求1所述复合酶制剂应用于烟叶发酵。