[发明专利]三重荧光定量RT－PCR检测A、B和H5亚型流感病毒的引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.三重荧光定量RT-PCR检测A型、B型和H5亚型流感病毒的引物及探针，其DAN序列如下：

A型     上游引物：5’CAGAGACTTGAAGATGTTTTTGC，

        下游引物：5’CTACGCRGCAGTCCTCGCTC，

        TaqMan探针：5’FAM-CAAGACCAATCCTGTCACCTCTGA-BHQ1；

B型     上游引物：5’AAATACGGTGGATTAAATAAAAGCAA，

        下游引物：5’CCAGCAATAGCTCCGAAGAAA，

        TaqMan探针：5’CY5-CACCCATATTGGGCAATTTCTATGGC-BHQ2；

H5亚型  上游引物：5’CCTTTACGACAAGGTCCGACT，

        下游引物：5’CCACTTATTTCCTCTCTTTTTARTCTTGCTTC，

        TaqMan探针：5’ROX-ACGGAACGTATGACTACCCG-BHQ2。

2.三重荧光定量RT-PCR检测A型、B型和H5亚型流感病毒的试剂盒，其特征在于：包含权利要求1所述的所有引物及探针。

3.根据权利要求2所述的三重荧光定量RT-PCR检测A型、B型和H5亚型流感病毒的试剂盒，其特征在于：所有引物及探针和buffer、MgCl₂ 5mM、dNTPs各1mM装于一个容器内构成RT-PCR反应buffer，各引物的浓度均为5mM，A型探针的浓度为250nM，B型、H5型的探针的浓度均为200nM；还包括Taq酶、反转录酶、DEPC水、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3所述的三重荧光定量RT-PCR检测A型、B型和H5亚型流感病毒的试剂盒，其特征在于：该试剂盒为48人份试剂盒，它含有：

RT-PCR反应Buffer  1ml

Taq酶             12ul

反转录酶          12ul

DEPC水            1ml

阳性对照          1ml

阴性对照          1ml。

5.根据权利要求3或4所述的三重荧光定量RT-PCR检测A型、B型和H5亚型流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述反转录酶是鼠源反转录酶。