[发明专利]产辅酶Q10新菌株——鞘氨醇单胞菌ZUTE03及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一株产辅酶Q₁₀新菌株——鞘氨醇单孢菌ZUTE03及其应用，属于微生物制药领域。

(二)背景技术

辅酶Q₁₀(CoenzymeQ₁₀，CoQ₁₀)广泛存在于动物、植物及微生物体内，是生物细胞呼吸链中重要的递氢体，也是一种良好的生化药物。它具有抗氧化性、消除自由基、提高机体免疫力等功能，已广泛应用于各类心脏病、糖尿病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治疗。制备辅酶Q₁₀的方法主要有动物细胞提取法、烟叶茄尼醇半合成法、完全合成法、微生物发酵法或植物细胞培养法。与其他方法相比，微生物发酵法具有产物活性高、原料成本低、易控制及可实现大规模生产等特点。获得优良的发酵菌株是微生物发酵法生产辅酶Q₁₀的关键之一。目前已报道的辅酶Q₁₀发酵菌株主要有假单孢菌属、酵母菌属、光合细菌属以及副球菌属等。发酵菌体提取辅酶Q₁₀方法多为醇碱皂化后提取方法，步骤烦琐，费时费力，且提取溶剂损耗较大。

(三)发明内容

本发明的目的是为了提供一株产辅酶Q₁₀产量较佳的新菌株，且利用该菌种发酵液制备辅酶Q₁₀时采用同步皂化和提取工艺，简化提取工艺，节约人力与试剂，在保证产物几乎无损失条件下，提高提取工艺效率。

为达到发明目的本发明采用的技术方案是：

产辅酶Q₁₀新菌株——鞘氨醇单孢菌ZUTE03(Spingomonas sp.ZUTE03)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2007年6月18日，保藏编号CCTCC M.207084。

所述鞘氨醇单孢菌ZUTE03特征如下：菌株在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上培养1天后呈亮黄润泽，较小，圆形，边缘齐整，表面光滑，易挑起，产黄色素；菌体呈杆状，大小为(0.20～0.36)μm×(0.40～0.80)μm，具极生单根鞭毛，能运动，革兰氏染色阴性，无芽孢；好氧，过氧化氢酶阳性，还原硝酸盐阴性，利用葡萄糖、乳糖等产酸，不产生吲哚，最适宜生长温度为28～30℃。

ZUTE03菌株，分离自钱塘江沿岸杭州九堡段土壤，经形态学、生理生化、Biolog GN鉴定和16SrRNA序列的系统发育分析，发现该菌株属于鞘氨醇单孢菌属，命名为Spingomonas sp.ZUTE03。目前国内外尚未见到有关鞘氨醇单孢菌应用于辅酶Q₁₀生产的研究报道。

发酵菌体中同步皂化和提取辅酶Q₁₀的工艺同样未见报道。

鞘氨醇单孢菌ZUTE03主要用于发酵制备辅酶Q₁₀。

具体的，所述的应用为：以鞘氨醇单孢菌ZUTE03接种于适用于鞘氨醇属菌种的液体培养基，25～28℃下培养24～36h，所得发酵液离心收集湿菌体，湿菌体经皂化提取得到所述的辅酶Q₁₀。

优选的，所述皂化提取为同步皂化提取，即皂化与提取同步进行。

具体的，所述适用于鞘氨醇属菌种的液体培养基按如下配方配制：每加入1000mL水加入碳源10～20g、氮源5～15g、KH₂PO₄ 0.5g、Na₂HPO₄1.5g、MgSO₄ 0.5g，pH6.0～8.0。

所述氮源优选为硫酸铵。

所述碳源优选为葡萄糖。

优选的，所述适用于鞘氨醇属菌种的液体培养基按如下配方配制：每加入1000mL水加入葡萄糖15g、硫酸铵10g、KH₂PO₄ 0.5g、Na₂HPO₄1.5g、MgSO₄ 0.5g，pH8.0。

具体的，所述同步皂化提取工艺按如下步骤进行：将湿菌体2g移入容器内，加入0.3～0.7g焦性没食子酸，1～2.5g KOH，10～20ml甲醇，3～7ml蒸馏水，混匀，同时加入C5～C10的烷类试剂30～70ml，在70～90℃水浴锅中回流，皂化并同步萃取产物30～60min，迅速冷却至室温，倒入分液漏斗，剧烈振荡后静置分层取上层有机相，于旋转蒸发仪50℃下将其浓缩至5～10ml，后放入冰箱冷冻，析出胆固醇，过滤，取滤液，即得辅酶Q₁₀。