[发明专利]水体中微囊藻毒素的检测方法

权利要求书

1.一种水体中微囊藻毒素的检测方法，该方法是：1)微囊藻毒素全抗原的合成及鉴定：以戊二醛作为双功能交联试剂，按常规方法分别将BSA、KLH与藻毒素MC-LR进行偶联，得到微囊藻毒素的全抗原MC-LR-BSA以及MC-LR-KLH，并利用紫外分光光度计进行鉴定；2)多克隆抗体的制备与纯化：以MC-LR-KLH作为免疫原，免疫新西兰兔，按常规方法制备多克隆抗体并以硫酸铵纯化；3)免疫磁珠的制备：将MC-LR-BSA与纳米磁珠偶联，制备含MC-LR-BSA的免疫磁珠；4)包埋抗体至硝酸纤维素膜：用喷膜仪将准备包被的目的抗体载于硝酸纤维素膜上，使目的抗体达到一定量，室温下干燥；用3％牛血清蛋白-磷酸缓冲液(BSA-PBS)，室温封闭60分钟；用0.01％十二烷基硫酸钠-磷酸缓冲液(SDS-PBS)洗涤15分钟，共三次，室温干燥后，保存于4～20℃；5)检测测试板的制作：将磁标MC-LR-BSA的偶联垫、包埋多克隆抗体的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、覆盖膜、测试板外卡组成测试板；6)样品检测：将不同浓度的标准品以及检测样品加入测试板上样孔，样品通过层析作用从试纸条上流过，室温下反应3～5分钟后，将测试板放入磁信号检测仪进行检测，并且此检测仪器可以将已经转化成磁场信号的生物学反应信号进一步以电信号方式输出；绘制标准曲线后，依据标准曲线求出待测样品的具体值。

2.根据权利要求1所述的体中微囊藻类毒素的检测方法，其特征在于所述的免疫磁珠的制备是：吸取20微升磁珠至小试管中，置于磁场中使磁珠与贮存液分离，用40微升MES清洗缓冲液清洗磁珠两次，重悬浮磁珠于20微升MES清洗缓冲液中；分别将60微克左右的碳化二亚胺(EDC)和81微克N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入至磁珠溶液中，37℃震荡孵育1小时。随后分别用40微升MES清洗缓冲液清洗磁珠两次，用20微升硼酸清洗缓冲液清洗磁珠两次后，重悬浮磁珠于20微升硼酸清洗缓冲液中；将5微升左右的MC-LR-BSA(8毫克/毫升)加入至磁珠悬液中，37℃震荡孵育3小时；再加入3微升的10％牛血清白蛋白封闭液，37℃震荡孵育1小时；用20微升硼酸清洗缓冲液清洗磁珠两次，并将磁珠转移至新管中；弃掉硼酸清洗缓冲液，用30微升偶联缓冲液重悬浮磁珠；用定量加样装置将已经标记有MC-LR-BSA抗原的磁珠加入磁珠偶联垫。