[发明专利]食物过敏原特异性IgG ELISA检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及了一种定量检测人血清中食物过敏原特异性IgG的酶联免疫吸附分析(ELISA)检测试剂盒及其生产方法，筛查确定致敏食物过敏原及过敏反应程度。

背景技术

过敏性疾病是现代社会中最常见的一种疾病，它是由广泛存在的过敏原引发的，我国大约有5-10％的人受过敏原侵扰。过敏反应(allergic reaction)又称变态反应，过敏原(allergen)又称变应原。过敏反应有两个主要类型：由IgE介导的速发型过敏反应，通常在接触过敏原后短时间立即发生，病症明显；由IgG及其亚类IgG4介导的迟发型过敏反应，通常在接触过敏原几小时或几天后才会出现反应症状，有长期疲劳、关节炎、荨麻疹、湿疹、头痛、肠胃功能失调及其它慢性症状。IgG介导的过敏反应，通常是由食物过敏原引发的，且患者皮试多呈阴性，迫切需要从众多食物中筛查出引发过敏反应的过敏原，进而很好地对症预防和治疗(周光炎等译，2002，免疫学，PP323-369，人民卫生出版社；Sampson HA，1999，Food allergy，part1，J Allergy ClinImmunol，103：717-728)。

过敏患者摄入食物过敏原后，体内产生的IgG抗体及其亚类与脱颗粒化的嗜碱性粒细胞及肥大巨细胞结合，活化互补的递级细胞和组织，引发过敏反应；在过敏患者的血液中可检测出IgG及其亚类浓度的升高(BrightonWD，1980，Frequency of occurrence of IgG(S-TS)，Clin Allergy，10：97-100)。过敏患者再次摄入食物过敏原后，提高循环血液中特异性IgG浓度，已被为减轻过敏反应病症而进行免疫治疗患者的血清IgG浓度的检测多次证实(Kemeny DM etal，1986，Subclass of IgG in allergic disease，Clim Allergy，16：571-574)。

根据近40年来的大量研究，食物过敏原分两大类：植物蛋白和动物蛋白。由它们的结构和功能特性，含过敏原的植物蛋白的是豆科植物、树坚果、谷物、水果、蔬菜等中的醇溶蛋白的超家族，花生、树坚果、大豆等的种子贮藏蛋白的杯状蛋白超家族和谷物的α-淀粉酶、蛋白酶抑制剂等植物防卫系统的蛋白家族(Breiteneder H er al，2004，A classification of plant food allergens，J AllergyClim Immunol，113：821-830)；含过敏原的动物蛋白的来源为哺乳动物的肉及乳蛋白，鸟类、鱼、甲壳动物、软体动物、两栖动物和爬行动物等的肉蛋白，来源广发、丰富；以它们为原料还生产了数不清的“营养健康食品”(WalJM，1999，Nahrung，43：s168-174)，迫切需要体外检测食物过敏原。

过敏反应在临床上可以通过皮肤试验以及各种体外检测方法，如放射性免疫分析(RIA)法、免疫印迹(IS)、免疫沉淀(IP)和酶联免疫吸附分析(ELISA)法等，结合发病症状等来确定致敏的过敏原(Sampson HA，1999，Foodallergy，part2，J Allergy Clin Immunol，103：981-989)。ELISA方法较RIA、IS、IP等方法安全、简单、经济快速，是世界上当前发展最快且最常用的体外检测致敏性过敏原及其过敏程度的方法(Yunginger JW er al，2002，J Allergy ClinImmunol，105：1077-1084)。

ELISA试剂盒检测食物中过敏原蛋白所需技术，如过敏原蛋白的提纯方法，人IgG抗体的制备、纯化，抗人IgG抗体生产提纯，酶标记抗体的制备纯化等均已成熟(Porstmann T，kiessig ST，1992，Enzyme immunoassay techniques，Anoverview，J Immunol Methods，150：5-21)为食物过敏原特异性IgG ELISA检测试剂盒的商品化生产建立了技术基础，国外也已生产出了商品化体外检测试剂盒，如Pharmacia公司(www.purduepharma.com)的immuno CAP^TM 100 specificIgG kit，Biomerica公司(www.biomerica.com)的Allerquant IgG food allergyacreening ELISA kit等。

发明内容