[发明专利]鼠抗人酯多糖受体抗体轻链可变区基因及用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术，主要涉及鼠免疫球蛋白轻链可变区基因，尤其涉及到鼠抗人酯多糖受体(国际命名CD14，抗体克隆名：ZCH-7-2F9)单克隆抗体轻链可变区基因及用途。

背景技术

血液系统肿瘤如白血病、淋巴瘤是严重危害人类健康的顽症，化学治疗(化疗)仍然是当前治疗血液系统恶性肿瘤的主要方法，但常规化疗对肿瘤细胞与正常细胞之间的选择性较差，因而毒副作用较大，且反复非根治性剂量的化疗，又容易诱生肿瘤细胞的耐药，最终，许多患者因耐药肿瘤复发或大剂量化疗致严重毒副作用如严重感染、出血、重要脏器功能衰竭等而告治疗失败。

与化疗比较，单克隆抗体靶向治疗具有良好的选择性和特异性，它们只杀伤表达靶分子的细胞，而不损伤无靶分子表达的血细胞成分和组织器官细胞，从而可大大提高靶向治疗的特异性，降低药物的全身毒副作用。有效的靶向治疗取决于良好的先导分子，系列特异性表面分化抗原单抗作为先导分子，将药物或毒素特异地带到肿瘤细胞膜上或细胞内，或通过完整抗体激活补体(CDC)或通过抗体介导细胞毒(ADCC)作用以达到杀灭白血病细胞的目的，有着无可替代的优势。目前，大多数高亲和力的单抗属于鼠源性的，用鼠源性单抗进行临床靶向治疗可以发生严重的血清病或因产生人抗鼠免疫球蛋白(Ig)抗体(HAMA)而消除药物的抗肿瘤作用等问题，限制了它们在临床上的有效应用。为了在临床上能大量重复使用鼠源性单抗治疗血液系统恶性肿瘤，就必须最大限度地降低鼠源性单抗对人体的免疫原性。现知，抗体的免疫原性主要位于抗体恒定区(Fc)段，而识别抗原的部分(抗体的可变区)则抗原性较弱。通过适当的方法去除鼠Ig的Fc段而保留可变区Fv段，可以大大降低鼠单抗的免疫原性而保留其识别抗原的特异性。人鼠嵌合型鼠抗人B淋巴细胞表面抗原CD20单抗是该技术的典型代表，其研制方法是采用人B淋巴细胞来免疫Balb/C纯种小白鼠，然后通过鼠-鼠杂交瘤技术研制出抗人CD20单抗杂交瘤细胞株。通过对该杂交瘤细胞株编码抗人CD20免疫球蛋白可变区肽链的信使核糖核苷酸(mRNA)的扩增、克隆以及测序，并将编码该抗体可变区基因与人免疫球蛋白恒定区基因进行重组表达，制成嵌合型人鼠CD20抗体(可变区为鼠源性，恒定区为人源性的基因工程抗体)，使该抗体保留识别CD20抗原的特性，从而特异性地识别人B系淋巴细胞包括表达该抗原的所有淋巴瘤细胞、白血病细胞以及正常细胞，而消除了由鼠源性恒定区对人体产生免疫反应的缺点，从而起到有效的治疗作用。该抗体的临床应用已经使B细胞系肿瘤的治疗进入了一个崭新的时代。要使一个鼠源性单抗能在临床病人体内反复使用的关键是鼠源性抗体的人源化基因改造，而人源化基因抗体研制的关键是该鼠源性抗体可变区基因的序列，因为抗体靶向作用的关键是该抗体的可变区，而编码可变区基因序列是决定每一个单抗各自靶向作用的关键。

发明内容

本发明的一个目的是提供ZCH-7-2F9(CD14)鼠免疫球蛋白(单抗)轻链可变区基因，具有SEQ ID NO 1的核苷酸序列，及以该核苷酸序列为模板，翻译成抗体轻链可变区蛋白或氨基酸序列SEQ ID NO 2。本发明提供的是鼠抗人酯多糖受体(国际命名CD14，抗体克隆名：ZCH-7-2F9)单克隆抗体轻链可变区基因。

本发明的另一个目的是提供ZCH-7-2F9(CD14)鼠免疫球蛋白轻链可变区基因在制备治疗急性单核细胞性白血病药物中的应用。

采用单抗靶向治疗某种特定血液肿瘤的基本条件是抗体必须能识别某种血液肿瘤细胞膜抗原。ZCH-7-2F9单抗具有良好的识别急性单核细胞白血病细胞膜CD14抗原而不识别其他组织、细胞成分的特性，体外实验表明，2F9免疫毒素对2F9阳性的急性单核细胞白血病细胞具有良好的选择性杀伤作用，而对2F9阴性的细胞却无作用，因此，该抗体具有潜在治疗急性单核细胞性白血病的应用前景。