[发明专利]一种抗肿瘤抗生素及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的抗肿瘤抗生素及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

恶性肿瘤是一类严重威胁人类生命和生活质量的世界性疾病，为仅次于心血管疾病的第二大死因。多年来已从微生物代谢产物中发现了为数众多的抗肿瘤活性物质，大量来源于微生物的抗癌剂在制药工业日益起着重要作用。放线菌是一类数量大、种类多、具有重要实用价值和开发潜力的微生物资源，是各种生理活性物质的重要产生菌。由放线菌产生的抗肿瘤抗生素，如阿霉素、丝裂霉素、博莱霉素、更生霉素等是目前肿瘤治疗中常用的药物，在肿瘤化学治疗中占有重要地位。

我国抗生素的研究主要以跟踪和仿制为主，自行开发、创制的能力和水平很低，具有自主知识产权的新化合物的报道很少。因此，具有自主知识产权的新化合物的研究，不仅直接为人类疾病的治疗提供新品种，而且为新药的研发提供活性先导化合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种不同于已知吡喃萘醌类抗生素结构的新抗肿瘤抗生素，它对肿瘤细胞，特别是对人早幼粒白血病细胞有较强的抑制作用。

本发明的另一个目的是提供一种抗肿瘤抗生素的制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种抗肿瘤抗生素，本抗生素的产生菌株已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏日期：2007年1月29日；保藏登记入册编号为CGMCC No.1935；通过培养一株拟诺卡氏菌株(Nocardiopsis sp.)YIM 80133，再从其发酵液中分离纯化提取物，得到本抗肿瘤抗生素；本抗肿瘤抗生素是分子式为C₂₁H₂₀O₁₀，分子量为432.38的化合物，该化合物具有如下结构：

本发明的抗肿瘤抗生素的制备方法，包括以下步骤：

(1)菌种液体种子培养：①液体种子培养基的制备：取酵母膏2.0～6.0g；葡萄糖2.0～6.0g；麦芽膏3.0～7.0g；复合维生素0.5～2.0ml；加水至1000ml，pH 9.0，120℃灭菌30min；②发酵：将菌株YIM 80133加到灭菌后的培养基中，28℃下于转速为190～250转/分钟的摇床上摇瓶发酵2天；

(2)菌种发酵培养：①发酵培养基的制备：取大豆粉10.0～30.0g；甘露醇10.0～30.0g；加水至1000ml，pH 9.0，120℃灭菌30min；②发酵：将上述方法(1)中得到的菌株YIM 80133种子液加到灭菌后的培养基中，加菌种量为发酵培养基重量的10％，28℃下于转速为190～250转/分钟的摇床上摇瓶发酵5～7天；

(3)发酵液处理：①发酵液经2500～3500转/分钟离心，离心时间为15～25分钟；②以等体积乙酸乙醋萃取4～6次，回收乙酸乙醋，得到具有活性部位的褐色油状物；③进行硅胶柱层析，以三氯甲烷∶甲醇80∶1到9∶1梯度洗脱，收集三氯甲烷∶甲醇为50∶1的活性组分，回收溶剂，得到粗品一种抗肿瘤抗生素；④将粗品一种抗肿瘤抗生素进行凝胶柱层析，甲醇洗脱，收集活性组分，回收溶剂，得到一种抗肿瘤抗生素较纯品；⑤将较纯品一种抗肿瘤抗生素经过制备高效液相纯化，收集活性峰段，回收溶剂，冷冻干燥，得到一种抗肿瘤抗生素纯品。

在种子培养基的制备中最好是酵母膏为4.0g；葡萄糖为4.0g；麦芽膏为5.0g；复合维生素为1.0ml。

在发酵培养基的制备中最好是大豆粉为20.0g；甘露醇为20.0g。

摇瓶发酵时摇床转数为220转/分钟为宜，发酵时间以6天为宜。

发酵液分离时，离心机转速以3000转/分钟为宜，所述的离心时间为20分钟为宜，所述的乙酸乙醋的萃取次数以5次为宜。

一种抗肿瘤抗生素纯品经分析型HPLC检测，色谱柱(250×4.6mm，5μm，Alltech，C18)；甲醇∶水7∶3等度洗脱，检测波长254nm，流速1.0ml/min，证实一种抗肿瘤抗生素纯品纯度高于98％。

本发明抗肿瘤抗生素经常规MTT法实验证明，它对人肿瘤细胞株有抑制作用，其抗肿瘤活性如表(1)所示。

表(1)本发明抗肿瘤抗生素的体外抗肿瘤活性

附图说明

图1为本发明抗生素的化学结构式；

图2为本发明抗生素的紫外吸收光谱；

图3为本发明抗生素的红外吸收光谱；

图4为本发明抗生素的氢谱(DMSO)；

图5为本发明抗生素的碳谱(13C-NMR、DEPT)；

图6为本发明抗生素的HSQC(异核多量子相关)；