[发明专利]用于检测葡萄糖转运蛋白4上膜的探针和方法

权利要求书

1.一种用于检测葡萄糖转运蛋白4上膜的探针，该探针是胰岛素响应 氨肽酶(IRAP)与pH敏感的荧光蛋白的融合蛋白，所述上膜是指向细胞 膜的转运，其中将所述胰岛素响应氨肽酶的两端分别用pH敏感的荧光蛋 白和pH不敏感的荧光蛋白标记，其中所述pH敏感的荧光蛋白是pHluorin 并且所述pH不敏感的荧光蛋白是TDimer2。

2.根据权利要求1所述的探针，其中所述探针为氨基酸序列为SEQ ID  No.1的TDimer2-IRAP-pHluorin。

3.制备根据权利要求1的探针的重组表达质粒，其为保藏号为 CGMCC No.1898的大肠杆菌菌株中的质粒pTDimer2-IRAP-pHluorin。

4.瞬时转染或稳定表达根据权利要求1的探针的细胞，所述细胞是脂 肪细胞或肌肉细胞。

5.根据权利要求4所述的细胞，其中所述脂肪细胞是保藏编号为 ATCC CL-173的3T3-L1细胞系及其分化的脂肪细胞。

6.根据权利要求4所述的细胞，其中所述肌肉细胞是保藏编号为 ATCC CRL-1458的L6细胞系及其分化的肌肉细胞。

7.根据权利要求4所述的细胞，其中所述肌肉细胞是保藏编号为 ATCC CRL-1772的C2C12细胞系及其分化的肌肉细胞。

8.一种鉴定增强葡萄糖转运蛋白4上膜的化合物的方法，所述上膜是 指向细胞膜的转运，所述方法包括以下步骤：

a.获得瞬时转染或稳定表达根据权利要求1的探针的细胞；

b.将化合物与所述细胞温育，和

c.比较在与所述化合物温育前后检测到的探针的荧光强度。

9.根据权利要求8的方法，其中所述探针是氨基酸序列为SEQ ID No. 1的TDimer2-IRAP-pHluorin，并且在步骤c中比较在与所述化合物温育前 后pHluorin与TDimer2的荧光强度比值的变化，该比值增加表明所述化合 物增强葡萄糖转运蛋白4向细胞膜的转运。

10.一种检测细胞胰岛素抗性的方法，所述方法包括以下步骤：

a.获得瞬时转染或稳定表达根据权利要求1的探针的待测细胞；

b.将胰岛素与所述细胞温育，和

c.比较在与胰岛素温育前后检测到的探针的荧光强度。

11.根据权利要求10的方法，其中所述探针是氨基酸序列为SEQ ID  No.1的TDimer2-IRAP-pHluorin，并且在步骤c中比较在与胰岛素温育前 后pHluorin与TDimer2的荧光强度比值的变化，如果该比值没有显著变化 则表明所述细胞具有胰岛素抗性。

12.根据权利要求11的方法，其中所述细胞是脂肪细胞或肌肉细胞。