[发明专利]抗细胞增殖或抗肿瘤药物的筛选试剂盒、筛选方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗细胞增殖、抗肿瘤药物的筛选试剂盒，一种抗细胞增殖、抗肿瘤药物的筛选方法以及Ste20家族激酶在筛选抗细胞增殖、抗肿瘤药物中的用途。更具体地说，涉及到通过检测加入待测药物以及重组或天然的程序性细胞死亡因子10(Programmed Cell Death 10，PDCD10)以后，不育20(Sterile 20，Ste20)家族激酶的活性的变化来鉴定和评价该药物是否为抗细胞增殖、抗肿瘤药物。本发明属于分子生物系及生物化学领域。

背景技术

本发明在于使用PDCD10基因及Ste20家族激酶来筛选抗细胞增殖、抗肿瘤药物。

PDCD10基因(也曾命名为TFAR15)克隆自撤除生长因子GM-CSF培养条件下的TF-1细胞，染色体定位是3q26.1，基因长度50kb，编码212个氨基酸，通过数据库检索，发现该基因从线虫到人类高度保守，其具体序列可见下面的序列表。并且，分析其氨基酸序列未发现信号肽、跨膜区及任何已知功能结构域。

以前的研究提示PDCD10分子可能与细胞凋亡和肿瘤相关。去神经支配后萎缩骨骼肌中PDCD10基因表达水平下调，重组PDCD10蛋白可以抑制成纤维细胞系在某些凋亡诱导条件下(如staurosporine，放线菌酮，或TNF-a等)的自然死亡。这些结果提示PDCD10作为抗凋亡分子发挥作用(王玉刚，刘洪涛，张颍妹，马大龙.一个人类凋亡相关新基因TFAR15的cDNA克隆化与表达中国科学-C辑生命科学，1999，Vol42，323-329)。进而，基因芯片数据提示PDCD10基因可能与肿瘤信号转导有关，在胰腺癌、抵抗顺铂诱导的凋亡的转移大肠癌细胞系、喉鳞状细胞癌、抗肿瘤物质cantharidin引起凋亡的肝癌Q-GY27703细胞及IFNγ转化的肝癌细胞系HepG2等细胞中PDCD10mRNA表达均有上调。Kamath R.S等还发现，用RNAi特异性关闭PDCD10在C.elegans基因组的同源基因会造成40％的胚胎致死；Shapshak P等在利用基因芯片对AIDS相关的痴呆症患者脑组织和三体型痴呆症患者的上皮成纤维细胞的基因表达谱进行研究时发现，在这两类患者中PDCD10基因的表达都有明显上调；最近的研究又发现PDCD10是脑海绵状血管瘤的致病基因(Bergametti，F.，Denier，C.，Labauge，P.，Arnoult，M.，and et al.Mutations within the Programmed Cell Death 10 Gene Cause CerebralCavernous Malformations(2005)Am J Hum Genet.76，42-51)；以上结果显示PDCD10在与细胞凋亡有关的疾病中确有作用。然而，PDCD10分子的功能和作用机制还尚未得到阐述。

Ste20是一种出芽酵母丝氨酸/苏氨酸激酶家族，在酵母、线虫、果蝇及哺乳类中保守存在，现有证据提示该家族蛋白作为MAPK信号转导通路上游的MAP4K分子发挥作用，进而影响细胞的凋亡、增殖、细胞形态及细胞骨架重排(Ippeita Dan，NorinobuM.Watanabe and Akihiro Kusumi.The Ste20 group kinases as regulators of MAP kinasecascades.TRENDS in Cell Biology(2001)11；220-229)。MAPK通路是最经典细胞信号转导通路，广泛存在于哺乳细胞中，目前发现的有最主要的三种MAPK通路，包括ERK、JNK和p38通路。其中ERK MAPK通路参与细胞生长、发育、分裂及细胞间的功能同步等多种生理过程，并在细胞恶性转化等病理过程中起重要作用。越来越多的证据显示ERK MAPK通路在人类癌症的病理发生、发展和致癌行为方面起作用。异常的激酶磷酸化作用在许多疾病作用过程中都扮演了角色，例如癌症、糖尿病致视网膜病、风湿性关节炎和帕金森氏症等疾病。因而当前许多正在开发的新药便以抑制蛋白质激酶为目标。