[发明专利]维生素K2类药物中顺式异构体的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种维生素K2类药物杂质的检测方法，特别是涉及维生 素K2类药物中顺式异构体的检测方法。

背景技术

随着人类寿命的延长，人口老龄化给人类健康带来了新的问题。骨质 疏松症及其引起的骨折在当前常见疾病中位于第7位，严重威胁着中老年 人的健康。

经研究确认，维生素K2类药物具有成骨作用，促进钙代谢，同时还 能抑制破骨细胞引起的骨吸收，从而增加骨密度，防治骨质疏松。四烯甲 萘醌作为维生素K2类药物的一种，具有强效促凝血作用(1972年已批准 作为促凝血药上市)。四烯甲萘醌也具有促进成骨和抑制骨质吸收两方面 作用，它不仅能活化成骨细胞、促进钙化，而且能抑制破骨细胞的分化， 进而抑制破骨细胞的骨质吸收能力，从而抑制骨质疏松，能够作为改善骨 组织代谢不均衡导致的骨质疏松症的药物。

顺式异构体作为维生素K2类药物中的已知杂质，是该类药品质量控 制中的重要指标。现有的检测顺式异构体杂质的方法多为薄层色谱法，如 《日本药局方》中四烯甲萘醌顺式异构体的检查就采用薄层色谱法。但是， 该方法的局限性表现为：专属性差，精密度低，无法进行准确检测和定量， 因而无法准确控制药品中顺式异构体的含量。因此，在开发维生素K2类 药物的同时，需要建立更完善的检测顺式异构体的方法。

发明内容

本发明的目的是由下述技术方案来实现的：

一种维生素K2类药物中顺式异构体的高效液相色谱检测方法，所述 方法采用硅胶为填料的正相色谱柱以及由一种选自正己烷、正戊烷、石油 醚、环己烷、异辛烷和正庚烷中的低极性溶剂和一种选自正丁醚、异丙醇、 正戊醇、四氢呋喃、二氯甲烷和乙醇中的高极性溶剂组成的流动相。

在上述检测方法中，所述维生素K2类药物为具有下式所示结构的化 合物：

其中，n的范围为1-10，优选为四烯甲萘醌(n＝4)。

在上述检测方法中，所述流动相的组成为：按体积比，低极性溶剂∶ 高极性溶剂＝100-60∶0-40；优选地，按体积比，低极性溶剂∶高极性溶 剂＝99-70∶1-30。所述流动相的组成可以为：按体积比，正己烷∶正丁 醚＝100-60∶0-40；或者按体积比，石油醚∶正戊醇＝99-70∶1-30。

所述检测方法中采用二极管阵列检测器，检测波长为200nm-380nm， 优选为270nm。所采用的色谱柱可以是但不限于以下色谱柱中的任意一 种：迪马公司硅胶柱Inertsil SIL-100A(5μm 4.6×250mm)；迪马公司氰基 Inertsil CN-3(5μm 4.6×250mm)；Therm公司硅胶柱Hypersil Silica(5μm 4.6×150mm)或安捷伦公司硅胶柱Agilent Prep-SIL(5μm 4.6×250mm)。所 述检测方法应采用避光操作，进样量小于0.8μg。

本发明的检测方法比《日本药局方》中四烯甲萘醌顺式异构体的检测 方法具有更高的灵敏度和更好的专属性。它使用市场上容易获到的高效液 相色谱仪和色谱柱，HPLC分析的操作程序和数据处理方法又是药物分析 技术人员所熟知的，因而便于推广使用以及实验室间数据的比较与重现， 也有利于生产过程中对原料及制剂的质量进行监控。

附图说明

图1四烯甲萘醌反式异构体和顺式异构体HPLC分离色谱图。

具体实施方式

实施例1

HPLC分析条件：高效液相色谱分析采用配有二极管阵列检测器的高 效液相色谱仪Waters 2695_996，以及安捷伦公司的Agilent Prep-SIL(5μm 4.6×250mm)硅胶柱。流动相为正己烷-正丁醚(体积比为95∶5)，检测 波长为270nm，使用自动进样器，每次进样20μl。

各取四烯甲萘醌反式异构体和顺式异构体适量，准确称重，用上述流 动相配制成浓度为1mg/ml的溶液，采用上述仪器和条件进行分析，获得 HPLC色谱图，如图1所示。在该色谱条件下，四烯甲萘醌反式异构体的 保留时间为22.863min，四烯甲萘醌顺式异构体的保留时间为19.958min， 两者的分离度大于1.5，可达到基线分离。

实施例2