[发明专利]一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞培养的方法，特别是涉及一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法。

背景技术

对人工培养细胞来说，一般要求在培养液中含有5％-20％的血清，血清主要作用包括提供基本营养物质；提供激素和各种生长因子；提供结合蛋白；提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤；对培养中的细胞起到某些保护作用。但是使用血清培养细胞也存在以下缺点：(1)对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)；(2)血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡；(3)动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致；(4)取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠；(5)血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成；(6)大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵。

由于血清既昂贵又使用不方便，现有技术中的高血清浓度不良影响尤为明显，因此，亟需一种能在较低的血清浓度或无血清的条件下培养细胞的方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其特征是包括如下步骤：用含容积比为0-1％的血清培养液，在高于1个标准大气压10-180mmHg的压力下培养细胞20-50h。

优选的是：培养液中血清的浓度为0-0.5％。

本发明的一种无血清或低血清浓度的细胞培养方法，其关键是利用应压力代替较高浓度的血清。细胞在无血清或低血清和一定应压力的条件下生长，可降低实验成本，简化实验条件、减轻或排除血清中种类繁多的生长因子对细胞生长的影响，有利于更准确的观察特定实验刺激如单一的生长刺激因子或单一的生长抑制因子的生理、药理和病理的作用。无血清或低血清细胞培养，为廉价生产基因工程相关产物，如单克隆抗体提供了可能。

附图说明

图1为不同压力对平滑肌细胞生长的影响。

图2为含容积比0.5％血清常压培养24h的人脐静脉内皮细胞。

图3为含容积比0.5％血清高于1个标准大气压180mmHg压力培养24h的人脐静脉内皮细胞。

图4为无血清常压培养48h的大鼠平滑肌细胞。

图5为无血清高于1个标准大气压100mmHg压力培养48h的大鼠平滑肌细胞。

图6为可调压力细胞培养箱示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

低血清培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12株)

37℃、5％CO₂条件，HUVEC-12细胞常压培养于含容积比为10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM完全培养基中，待生长融合后，细胞用含容积比0.5％胎牛血清的DMEM洗三次，并用0.5％胎牛血清的DMEM培养24h，使其同步化，继续分别在高于1个标准大气压0mmHg和180mmHg恒压、37℃、5％CO₂条件下培养细胞24h。

结果见图2和图3，图3显示高压培养的血管内皮细胞在0.5％胎牛血清的条件下，细胞生长速度较常压培养的血管内皮细胞在0.5％胎牛血清的条件下(图2)生长速度快，细胞计数结果显示高压培养比常压培养细胞数增加30％。

5％CO₂混合气体由衡阳市西园气站提供(也可以采用其它企业出售的5％CO₂混合气体)。

可调压力细胞培养箱由普通细胞培养箱改造，培养箱门被改装加固能承受一定的压力。另外在外面设置了压力控制器可以稳定压力。具体结构见图6。

实施例2

无血清培养血管平滑肌细胞

大鼠第10代平滑肌细胞PBS洗三次，传代后分别在高于1个标准大气压0mmHg和100mmHg恒压、37℃、5％CO₂条件下培养于含100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的无血清的DMEM培养液中，培养细胞48h。