[发明专利]HLA遗传标记预测糖尿病肾病危险的方法及其易感基因

说明书

技术领域：

本发明涉及使用基因芯片检测HLA遗传标记来预测天津地区2型糖尿病患者已患有、将有可能发展成或者疑似患有肾病的一种方法，特别是使用HLA-A11、HLA-DR9、HLA-DQA1＊0302遗传标记检测天津地区2型糖尿病患者已患有、将有可能发展成或者疑似患有肾病的一种方法。

背景技术：

人类白细胞抗原(human leucocyte antigen，HLA)是人类主要组织相容性复合物基因的编码产物，定位于第6号染色体短臂的一个狭窄区域，包含有128个功能基因和96个假基因，很多基因座位存在大量的复等位基因，具有高度的多态性。1999年确认的HLA复等位基因已达到1029个。HLA作为是人体内最复杂的遗传多态性系统，在免疫调控过程中发挥重要作用，是人类发现的第一个与疾病有明确关联的遗传系统，已发现70余种疾病与该系统有关联，DM即为其中的一种。HLA多态性检测在医学实践和科研中具有十分重要意义，为器官、组织移植配型，疾病相关性研究，人类学及法医学上的应用等领域的发展提供了可靠的技术方法和有价值的资料。血清学方法是HLA-B抗原传统的经典分型方法，但是随着对HLA研究的深入和对分型技术要求的不断提高，以及越来越多的等位基因陆续被发现和命名，血清学方法已经无法获得足够的单特异性抗体，不能够分辨出所有的特异性，而且标准抗血清的筛选技术复杂，难度大，人力物力消耗大，另外血清学方法之间存在较多，较强的交叉反应，使HLAI、II类抗原亚型的分辨较为困难。

随着生物学技术的不断发展，HLA分型技术从传统的血清学、细胞学分型转向以PCR为基本方法的基因分型。近年来对I、II类抗原的基因分型研究取得了较大进展，其中PCR-SSP、PCR-SS0、PCR-SSCP(单链构像多态性分析)3种分型方法对I类抗原的分型均获得成功。但这些方法也存在一些明显的不足，如PCR-SSP方法，主要依赖于PCR技术，对某一基因个体进行分型时往往要设计大量的引物，这将很难避免接下来PCR过程中的污染问题而导致假阳性，而且操作复杂，需要通过多次的电泳来判断最后的结果，不适合大批量样本的分型，使其在临床应用上受到限制；PCR-SSCP法对分析小于400bp的PCR扩增产物十分有效，但此法仅能探知基因变异的存在，而无法确定变异的确切位置及内容，一般仅用作HLA匹配程度的分析，而不用来进行HLA的具体分型。

基因芯片是近年来兴起的一项前沿生物技术，是对传统生物技术如DNA杂交、分型和测序技术重大的飞跃和创新，是涉及到生物信息学，微电子技术，计算机科学，半导体技术等诸多自然学科的综合性技术，在生命科学领域中显出了巨大的潜能和诱人前景。基因芯片是指将许多特定的寡核昔酸片段或基因片段作为探针，有规律的排列固定于支持物上，然后与待测的标记过的样本基因进行特异性杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一个探针上的荧光信号进行检测，从而得出大量信息。基因芯片具有高度集成和并行处理的特点，所需试剂和样本量少，结果由计算机软件自动分析，是解决HLA众多等位基因分型的有效方法。由于HLA个体遗传学差异的本质是在编码其抗原产物的基因水平上，所以分析HLA基因型无疑是对HLA型别分析的最准确的方法，其准确性远高于血清学与细胞学分型，并已逐渐取代了前两者的位置，因此HLA抗原的DNA分型成为必然趋势。

自从70年代HLA免疫学分型方法迅速发展并应用于人类疾病的关系研究以来，各国学者开展了HLA与DM发展关系的研究，但大多数仅限于T1DM与HLA的研究，仅有少数关于T2DM与HLA关联的研究报道，而且大多数认为HLA与T2DM的发病无关。随着对T2DM异质状况研究的深入，发现遗传学因素在T2DM的发病过程中扮演重要角色，同时发现T2DM与HLA存在着某种关联，特别是进入上世纪90年代后，分子生物学基因分型方法的广泛应用，对HLA与T2DM关联的研究又广泛开展。Diamantopoulos EJ等研究表明HLA-A3是T2DM发生早期动脉粥样硬化的保护基因；Tuomilehto-WolfE等研究发现HLA单倍型纯合子T2DM的发病率明显增加。