[发明专利]绿色木霉耐药性菌株及其与杀菌剂的协同应用技术

说明书

技术领域

本发明涉及绿色木霉耐药性菌株及其与杀菌剂的协同应用的方法，具体涉及一种绿色木霉耐药性菌株的诱发及其筛选技术，及绿色木霉耐药性菌株与杀菌剂(速克灵、醚菌酯)的相协同的复合制剂及其施用技术。

背景技术

木霉是自然界中普遍存在的一类真菌，在土壤、植物根围、叶围及种子、球茎表面经常可以分离到。近些年人们发现某些木霉是植物病原真菌的寄生菌或拮抗菌，如哈茨木霉(T.harzianum)、钩状木霉(T.hamatum)、绿色木霉(T.viride)可以防治真菌病害。迄今为止有关木霉在生防方面的研究已开展近70年，在国外已经出现了商品化的木霉制剂。如以防治李属果树银叶病(Chondrostereum purpureum)的木霉制剂在西欧已商品化生产；以色列的Makhteshim Agan公司开发的以哈茨木霉T39菌株为发酵液的生防制剂，商品名Trichodex，剂型为25％可湿粉，它可以用于防治灰霉病菌(Botrytis cinerea)、菌核病菌(Scleratina sclerotiorum)、叶霉病(Cladosporium fulvum)、霜霉病(Pseudoperonasplra cubensis)和白粉病(Sphaerotheca fuliginea)等叶部病害，在国内也有研究利用木霉菌控制植物病害。

从公开报道的文献中可以看到人们对生防木霉菌的研究，大多集中在菌株的筛选、鉴定、发酵培养及其利用等方面。其中，我们所筛选的绿色木霉(Trichoderma viride)是一种具有广谱抑病能力的真菌，可以通过拮抗、竞争、寄生、诱导抗性、促生等作用方式，对多种植物病害具有明显的防治作用。但是由于木霉菌制剂为活孢子制剂，单独使用控制作物病害会受到作用方式等的影响，造成施用效果欠佳，具一定迟效性，且存在活性不稳问题，因此阻碍了生物制剂的规模化生产应用。

目前，在农业生产中仍以使用化学药剂为主，且生物农药还不能解决生产中存在的所有问题，在使用过程中化学药剂会对生物制剂产生抑制作用，因此造成生物制剂与化学药剂两者之间成为一对矛盾体。因而为解决生防制剂应用中所面临的问题，同时减少化学农药的施用剂量，提出利用绿色木霉的耐药性菌株，将耐药性绿色木霉与化学药剂混合使用，通过施用对植物病原菌有特异性的杀菌剂并引进耐药性拮抗木霉菌株，实现控制植物病害的有益互作。对于提高生防制剂的防治效果，减少化学农药的使用剂量及农药残留将有一定的帮助。

发明内容

本发明旨在研究一种利用绿色木霉耐药性菌株及其与杀菌剂的协同应用的方法。

本发明是通过以下技术方案实现上述发明目的的。

主要包括将绿色木霉耐药性菌株与杀菌剂的混合施用的方法，包括由绿色木霉(Trichodermaviride)耐药性菌株的诱发及其筛选，杀菌剂(速克灵、醚菌酯等)与绿色木霉耐药性菌株的协同作用，及通过绿色木霉耐药性菌株发酵孢子、杀菌剂相协同的复合制剂及其施用技术，本发明的特征在于诱发具防治植物病害活性绿色木霉的耐药性，生物制剂中加入杀菌剂、孢子保护剂等的协同制剂配方和施用技术。

具体实施方式

下面进一步详述本发明。

1、绿色木霉对速克灵、醚菌酯耐药性菌株的筛选及诱导绿色木霉菌株耐药性的研究

经对具强拮抗灰葡萄孢霉活性的绿色木霉菌，采用射线照射(30W、直线距离30cm、照射30min)和药剂亚致死剂量(500μg/ml)方法，进行绿色木霉耐药性菌株的人工诱发，并进行耐药性菌株的筛选，获得高耐药性菌株3株、中等耐药性菌株28株、敏感性菌株3株。其中高耐药性菌株分别为Tr9701、Tr2008、Tr2009，具有较强的耐受速克灵、醚菌酯药剂活性。

对筛选的高耐药菌株孢子悬液于药剂选择压力高的条件下(500μg/ml)培养，3天内即可长出较为旺盛的菌落。

经亚致死剂量药剂驯化法对筛选的高耐药性绿色木霉菌株进行诱导绿色木霉菌对速克灵、醚菌酯耐药性试验，由试验结果可知速克灵、醚菌酯对绿色木霉耐药菌株不同培养世代的药剂敏感性影响较少，差异不显著，速克灵和醚菌酯对绿色木霉菌在药剂亚致死剂量的不同培养世代抑菌活性无显著差异。

2、速克灵、醚菌酯与绿色木霉对病菌协同作用的影响