[发明专利]20(S)-人参皂苷Rh2硫酸化修饰及其硫酸酯钠分离鉴定方法

说明书

技术领域

本方法涉及一种人参皂苷化学修饰及其衍生物分离鉴定方法，特别是20(S)-人参皂苷Rh₂硫酸化修饰方法及其所生成20(S)-人参皂苷Rh₂硫酸酯钠的分离鉴定方法。

背景技术

人参皂苷(Ginsenosides)是人参属植物人参、西洋参、三七等主要的有效成分之一，其结构由苷元和糖或糖链组成，为达玛烷型四环三萜类化合物。从其构效关系可以看出，人参皂苷的生物学活性与其所含的糖有关(窦德强，靳玲，陈英杰.人参的化学成分及药理活性的研究进展与展望.沈阳药科大学学报，1999，16(2)：151～156)，如Rh₂比Rg₃少一个糖，而抗肿瘤活性Rh₂比Rg₃活性强，Rd比Rg₃在C₂₀上多一个糖，却没有抗肿瘤活性。为了从人参皂苷中寻找活性更强药物，对其进行分子结构修饰，因苷元为较稳定的环烷烃结构，很难进行改造，而对其糖或者糖链进行化学修饰则更显得容易和可能。

从糖链化学修饰出发，通过查阅大量的文献资料我们注意到多糖硫酸化修饰。硫酸化多糖除有抗凝作用外，还具有多种生物活性，如增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗病毒等。人们通过化学修饰得到了较多的天然多糖的硫酸化衍生物。如香菇多糖、褐藻淀粉、右旋糖酐、地衣多糖、牛膝多糖、昆布多糖等硫酸化多糖，也表明具有很好的生物学活性(王兆梅，李琳，郭祀远，等.多糖结构修饰研究进展.中国医药工业杂志，2002，33，(12)：616～620；徐文清.硫酸酯化多糖研究的新进展.天津药学，2002，14(6)：1～4)。由于多糖硫酸化修饰后表现良好活性，人参皂苷修饰的着眼点应放在糖或者糖链硫酸化修饰。从理论上讲皂苷类的硫酸化修饰与多糖的硫酸化反应原理应该是相通的，都是在路易斯碱溶液中由SO₃H⁺取代多糖羟基中的H⁺，经中和得到硫酸酯盐(田庚元，李寿桐，宋麦立，等.牛膝多糖硫酸酯的合成及其抗病毒活性.药学学报，1995，30(2)：107～111)。

人参皂苷的化学修饰主要集中于皂苷糖链的降解、代谢和合成，尤其是酶解人参皂苷得到抗肿瘤活性强的Rh₂(赵越，苏适.人参皂苷Rh₂抗肿瘤作用的研究究.微生物学杂志，2003，23(2)：61～63)、化台物K(复旦大学.一种制备人参皂苷Compound-K的方法.中国专利，200410018000.0，2005-01-26)等为当前化学修饰研究的热点。1983年北川勋首次从红参中发现20(S)-人参皂苷-Rh₂(ginsenoside-Rh₂)，其化学名为20(S)-原人参二醇-3-氧-β-D-比喃葡萄糖苷[20(S)-protopanaxadiol-3-O-β-D-glucopytanoside](以下简称Rh₂)。从红参中分离到的Rh₂仅有十万分之一的收率，为了提高Rh₂的产量，大量研究者(金凤燮.酶法改变人参皂甙糖基制备稀有人参皂甙的方法.中国专利，99112764.1，1999-03-17；大连天马制药有限公司.20(S)-人参皂-Rh2的制备方法及其药物组合物及应用.中国专利，98100297.8，1998-02-05；中国科学院大连化学物理研究所.一种黑曲霉及用其酵解人参皂甙制备稀有低极性人参皂甙的方法.中国专利，02132403.4，2002-06-20)通过酸、碱或酶等降解方法对人参或西洋参中原人参二醇类皂苷进行糖链化学修饰，得到了更多的Rh₂，以满足实验或临床用药。目前尚未见皂苷类以及Rh₂的硫酸化修饰方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于：为人参皂苷Rh₂的分子结构改造提供一种硫酸化修饰方法，也为20(S)-人参皂苷Rh₂硫酸酯钠的分离纯化及鉴定提供方法，为进一步优化人参皂苷的分子结构，寻找生物活性更强的人参皂苷衍生物提供科学依据和新的研究思路，也为皂苷类化合物的深入开发提供一种思路。该方法包括酯化试剂的制备，20(S)-人参皂苷Rh₂与酯化试剂混合的摩尔比、反应的时间和温度，用柱层析分离的条件和步骤，衍生物的HPLC、IR、MS、¹H-NMR；¹³C-NMR的鉴定。

(一)酯化剂的制备