[发明专利]磁凝集法梅毒螺旋体抗体检测试剂

说明书

技术领域：

本发明涉及人血清中梅毒螺旋体抗体的检测。

背景技术：

梅毒是一种临床表现极为复杂，几乎可累及全身各器官的性病，并可通过胎盘传播给下一代，由于梅毒对人类的危害严重，所以世界各地均将其作为重要的社会和医疗问题给以高度重视。另外，及时区分梅毒阳性患者和实验引起的假阳性结果的病人，可以阻断病人的心理压力和盲目治疗。

血清学抗体检测是目前各国梅毒病例发现和诊断的主要依据。常规的梅毒血清学检测包括初筛和确证两个步骤。初筛试验(如VDRL、RPR、TRUST等)为梅毒螺旋体非特异性抗体检测方法，虽然该法简便、快捷，仅需一台平板振荡器、8分钟判读结果，但敏感性及特异性差，与风湿性疾病、系统性红斑狼疮等系统性疾病以及其它类螺旋体等偶可发生交叉反应，出现假阳性结果，故该法主要用于疗效观察和预后判定。梅毒确证采用梅毒螺旋体特异性抗体检测方法(如FTA-ABS、TP-ELIASA、免疫印迹法、TPHA、TPPA等)。目前常规使用的梅毒确证试验操作较复杂，耗费时间长，需专门的仪器设备，价格比较昂贵。新近有用PCR原理检测梅毒的方法，其灵敏度、特异性都非常好，在梅毒早期、二期、三期均可检出梅毒螺旋体，且不与其它螺旋体发生交叉反应，但微量的污染即可得出假阳性结果，还易受标本中组织、细胞等物质抑制导致出现假阴性结果，故未能推广。

发明内容：

本发明的目的是将重组梅毒抗原包被在磁性微粒表面上，采用磁凝集法对梅毒螺旋体抗体进行检测试剂及检测方法。

本发明中制成磁粒的有效成分的原料重量份组成为：

NaOH    2.5～3.5             HCl    0.25～0.35

FeCl₂·4H₂O  1.49～2.5    FeCl₃·6H₂O  3.5～4.6

本发明中制成磁粒的有效成分的原料重量份组成为：

NaOH  2.5～3.5               HCl    0.25～0.35

FeCl₂·4H₂O  1.49～2.5    FeCl₃·6H₂O  3.5～4.6

乙二胺四乙酸二钠  1.12       氯化胆碱  30

NaH₂PO₂  0.94             Na₂HPO₂·12H₂O  2.96

牛血清白蛋白3。

本发明磁凝集法梅毒螺旋体抗体检测试剂制备方法步骤是：

(1)、制备铁液：称取FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O，用HCl溶液溶解于同一容器内，过滤后用HCl溶液定容；

(2)、制备磁粒：室温条件下，将氮源、通气管道、反应器和搅拌器装好，向反应器内加入NaOH，并向反应器内持续通入氮气，启动搅拌器以每分钟10000转的转速进行搅拌，将铁液沿容器壁匀速加到反应器内，室温搅拌50分钟后关闭搅拌器电源和氮气阀门，结束反应；将反应器内液体移至三角烧瓶内，加入与三角煤瓶内液体等体积纯化水，在磁场中作用至液体澄清、磁粒聚集，吸弃上清；重复五次，最后将反应产物用纯化水悬起，定容；

(3)、制备成品：

a、配制稀释液：将EDTA、氯化胆碱、磷酸盐、BSA装入刻度瓶内混匀备用；

b、平衡：摇匀微粒立刻用刻度吸管加到瓶内，置于磁场中作用直到液体澄清、磁粒聚集，吸弃上清，移离磁场，将磁粒用等体积纯化水悬起，共洗涤3次，最后一次用PBS缓冲液悬起；

c、取重组梅毒螺旋体联合抗原，用PBS补足体积；

d、包被：将c步的梅毒螺旋体抗原的混合液加于磁性微粒液中，混合均匀后置室温孵育30分钟，期间持续慢摇，之后将磁粒用生理盐水洗涤除去未结合的抗原，共洗涤6次，每次用10毫升生理盐水，弃掉最后一次洗液的沉淀物即为包被后磁粒；

e、封闭：将包被后的磁粒用BSA悬起，置37℃摇床振摇2小时，之后用新配的稀释液洗涤6次，最后一次用20ml稀释缓冲液悬起，即为原液。

本发明中制成试剂盒的有效成分包括：

浓度大于95％的重组梅毒螺旋体抗原0.45～0.6