[发明专利]艾塞那肽冻干制剂制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域。

背景技术

生物大分子药物包括多肽、蛋白质、抗体等，目前主要用于治疗肿瘤、艾滋 病、心脑血管病、糖尿病等重大疾病，是21世纪药物研究开发中最有前景的领域 之一。

Exendin-4是由美国西南部的希拉毒蜥唾液腺中分泌的一种多肽，能激活处 于休眠状态的消化系统，刺激胰腺分泌胰岛素，使食物得到消化吸收。它还能抑 制能够使血糖升高的胰高糖素的释放，从而达到降糖效果。艾塞那肽(Exenatide) 是含39个氨基酸的多肽，是Exendin-4的人工合成品。艾塞那肽与人的胰高血糖 素(glucagon)有48％的同源性，与人的GLP-1(胰高血糖素样肽-1)有53％的同 源性。GLP-1是一种由肠胃分泌的肠促胰高血糖素激素，当人们摄取食物之后， 胃肠道就会分泌出GLP-1进而刺激胰岛β细胞分泌胰岛素。艾塞那肽可以和胰岛β 细胞上的GLP-1受体作用，并且其结合力是GLP-1的2.5倍(Kd＝0.136nM)。有文献 报道其在降低血糖作用效应方面是GLP-1的5530倍，而且其降糖作用的持续时间 也要比GLP-1更长。美国Amylin公司和礼来公司共同开发的糖尿病药物艾塞那肽 (商品名Byetta，化学名Exenatide)于2005年4月28日获得美国食品和药品管理局 批准上市。

生物大分子药物对反应物的选择性及药效作用具有其他药物无法比拟的高 效性，但生物大分子药物结构复杂，容易发生结构变化，造成活性降低、免疫原 性增强。并且，生物大分子药物存在多晶型、多构象、多尺度和聚集态复杂性等 问题，限制了其生物活性稳定性及其使用效率。

有资料显示，艾塞那肽存在分子间相互作用，动态光谱数据证实艾塞那肽存 在单体和聚集体之间的平衡。蛋白质或多肽的聚集，特别是高聚体的产生将导致 分子量增大，易出现沉淀，而活性单体形式相应减少。pH值及温度的变化、溶 剂的更换，均会导致聚集体的产生及数量的变化。分子排阻色谱法(Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC)研究结果表明，艾塞那肽水溶液中含有5％-25％的四聚体， 另外其Byetta液体制剂有在制备、储藏和使用过程中水解的现象，运输不方便、 放置和贮藏稳定性不好。

发明内容

本发明目的在于提供一种艾塞那肽冻干制剂制备方法，以解决艾塞那肽高聚 体的产生导致分子量增大、易出现沉淀、而使活性单体形式相应减少，和在制备、 储藏和使用过程中的水解、放置和贮藏稳定性不好的问题。本发明采取的技术方 案是：

用注射用水将处方量的艾塞那肽和辅料溶解，除菌除热源处理，将该溶液加 热至25-55℃，保持10-60分钟，自然冷却至室温后按照冻干工艺进行冷冻干燥。

本发明一种实施方案是，冻干前的加热步骤中，加热温度为40-45℃，加热 时间为25-30分钟。

本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂中的艾塞那肽90％以上为单体形 式，无高聚体(n≥4)形式。

本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂中的艾塞那肽98％以上为单体形 式，无高聚体(n≥4)形式。

本发明一种实施方案是，艾塞那肽冻干制剂包含主药艾塞那肽及辅料，辅料 包括冻干支撑剂、渗透压调节剂、pH调节剂和抑菌剂等。

本发明一种实施方案是，冻干支撑剂包括1.0％-10％的甘氨酸、甘露醇、葡 萄糖、蔗糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和多元醇及其组合物。

本发明一种实施方案是，冻干支撑剂为1.0％-5％的甘露醇和蔗糖。

本发明的优点在于：处方中加入适宜的冻干保护剂，冻干前先将艾塞那肽及 辅料水溶液进行加热处理，冻干后能够保留艾塞那肽的原有生物活性，且活性单 体形式可达98％以上，无四聚体及更大的聚集体。其冻干粉剂白色细腻、疏松不 塌陷粘连，稳定性好，易水化。与液体制剂相比，运输方便安全，放置和贮藏稳 定性更好，能够有效降低多肽药物的水解。

附图说明

图1是实施例中冻干前艾塞那肽溶液中聚集体情况；

图2是实施例中艾塞那肽冻干制剂中聚集体情况。

色谱条件

①仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪(四元泵、自动进样器、紫外检测 器)，