[发明专利]甘蓝型油菜自交不亲和的显性SCAR分子标记及应用

说明书

技术领域

本发明属于油菜育种技术领域，具体涉及人工创造的甘蓝型油菜自交不亲和的显性SCAR分子标记及其在甘蓝型油菜标记辅助选择中的应用。

背景技术

与甘蓝型油菜当前主要的杂种优势利用途径-细胞质雄性不育相比，自交不亲和杂种具有选育周期短、恢复系多、无不良胞质效应、制种产量高等优点，是油菜杂种优势利用的重要途径之一，近年来成为国内外育种学家研究的热点之一。

白菜型油菜(AA)和甘蓝(CC)都表现为天然的自交不亲和，而甘蓝型油菜(AACC)却表现为自交亲和，自交不亲和资源缺乏。通过对甘蓝型油菜自交不亲和变异株的定向选择、属间杂交、种间杂交等途径可选育出优良的甘蓝型油菜自交不亲和材料。然而甘蓝型油菜自交不亲和的遗传机制十分复杂，环境和外界因素影响较大，表现不稳定。传统的表型选择容易受到环境条件影响，存在许多缺点，效率低。分子标记辅助选择是一种高效的育种方法，它可在任何生长期进行，不受环境条件影响，可排除非等位基因相互作用而造成的干扰，具有快速、经济，效率高、准确性强等优点。在甘蓝型油菜自交不亲和系育种过程中将分子标记技术与回交育种相结合是一种全新的杂种优势利用途径。不但可以借助分子标记对自交不亲和性状的基因型进行直接而快速地选择，以排除环境和外界因素的影响，同时对背景进行选择，加快遗传背景恢复速度，缩短育种年限和减轻连锁累赘的作用。

芸薹属的自交不亲和性受单位点(S位点)、复等位基因控制，三个S位点基因：SLG(S-locus glycoprotein)，SRK(S-locus receptor kinase)和SP 11(S-locus protein 11)参与了花粉识别反应。在研究自交不亲和反应机理的过程中，分离克隆了很多甘蓝和白菜型油菜以及部分甘蓝型油菜的自交不亲和基因。本发明就是以这些基因为甘蓝型油菜自交不亲和性的侯选基因进行研究的。在甘蓝型油菜中，Parkin IAP等(Parkin IAP等，Identification of the Aand C genomes of amphidiploid Brassica napus(oilseed rape).，Genome，1995，38：1122-1131)发展了一个RFLP标记来定位甘蓝型油菜的S位点。Ekuere等(Ekuere UU等，Latent S alleles arewidespread in cultivated self-compatible Brassica napus.，Genome，2004，42：257-265)利用RFLP标记来鉴定人工合成的以及普通甘蓝型油菜的自交不亲和基因型。等(S等，Development of a molecular CAPS marker for the self-incompatibility locus in Brassica napusand identification of different S alleles.，Plant Breeding，2005，124：105-110)得到与甘蓝型油菜自交不亲和性完全连锁的共显性CAPS标记。这些工作为分子标记辅助选择(MAS)自交不亲和性奠定了基础，但目前在甘蓝型油菜自交不亲和的研究中鲜有应用。

发明内容

本发明的目的在于利用已有的自交不亲和基因序列设计引物，找到与甘蓝型油菜自交不亲和性连锁的SCAR(Sequence characterized amplified regions，序列特征扩增区域)分子标记，应用得到的SCAR分子标记对甘蓝型油菜自交不亲和表型进行快速而又准确的选择，以加快油菜自交不亲和新品系的选育。

本发明通过以下技术方案实现：

申请人通过筛选，得到一批人工创造的甘蓝型油菜自交不亲和S位点的显性SCAR分子标记，包括自交不亲和系S位点显性标记和自交不亲和恢复系S位点显性标记，其中自交不亲和系S位点显性标记被分别命名为SRKa，SRKb和SP11a，它们的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1，2，6所示；自交不亲和恢复系S位点的显性标记分别被命名为SLGa，SLGb和SLGc，它们的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：3，4，5所示。

一种筛选甘蓝型油菜自交不亲和S位点显性SCAR分子标记的方法，其步骤如下：