[发明专利]表达肠毒素大肠杆菌黏附素基因的重组菌及其在卵黄抗体饲料中的应用

说明书

技术领域

本发明动物营养学与饲料科学技术领域，同时涉及动物分子生物学的应用。具体地，本发明涉及一种表达猪肠毒素大肠杆菌K88和F18黏附素基因faeG和fedF的重组菌及其在制备卵黄抗体饲料中的应用。

背景技术

在规模化养猪生产中，肠毒素大肠杆菌(简称ETEC)是引起新生仔猪和断奶仔猪腹泻主要的致病因素。K88是引起断奶仔猪腹泻ETEC中最主要的一种菌毛基因型(Osek J等.Rapid and specificdifferentiation of enterotoxin-producing Escherichia coli strains from other gram-negative enteric bacteriausing multiplex PCR.Berl Munch Tierarztl Wochenschr，2000，113：265-70)；其中以K88ac亚型最为常见。在丹麦，Ojeniyi等(Ojeniyi B等.Detection of fimbrial and toxin genes in and their prevalence inpiglets with diarrhea.The applfication of colony hybridization assay，polymerase chain reaction andphenotype assays.J Vet Med B，1994，41：49-59)；在德国，Wittig等(Wittig W等.Prevalence of thefimbrial antigens F18 and K88 and of enterotoxins and verotoxins among Escherichia coli isolated fromweaned pigs.Zentralbl Bakteriol，1995，283：95-104)；国内的成大荣(成大荣.断奶仔猪源人肠杆菌毒力因子的分子流行病学及F18菌毛部分特性的研究.[博士学位论文].扬州：扬州大学图书馆，2005)的调查表明，F18是引起断奶仔猪水肿病和腹泻的另一主要的致病性大肠杆菌，与致断奶仔猪腹泻ETEC相关的2134P、8813、8199等大多属于F18ac(Wittig W等.Expression and plasmid transfer ofgenes coding for the fimbrial antigen F107 in porcine Escherichia coli strains.Zentralbl Bakteriol，1994，281：130-139)。

用提纯的K88或F18菌毛免疫母鸡，制备针对ETEC K88或F18的卵黄抗体，体外可以阻断K88或F18菌株对仔猪肠细胞的黏附，添加于饲料中，可以有效降低仔猪腹泻率，并在一定程度上改善仔猪的生长性能(Yokoyama H等.Passive protective effect of chicken egg yolk immunoglobulinsagainst experimental enterotoxigenic Escherichia coli infection in neonatal piglets.Infect Immun，1992，60：998-1007；Imberechts H等.Chicken egg yolk antibodies against F18ab Fimbriae of Escherichiu coliinhibit shedding of F18 Positive E.coli by experimentally infected pigs.Vet Micro，1997，54：329-341；Marquardt R R等.Passive protective effect of egg-yolk antibodies against enterotoxigenic Escherichiucoli K88⁺ infection in neonatal and early-weaned piglets.FEMS Immunol Med Microbiol，1999，23：283-288)。然而，上述资料中主要采用直接从ETEC菌株中分离提纯的方法制备菌毛蛋白抗原，由于一般ETEC的菌毛表达量十分有限，而且一些菌毛体外表达微弱甚至不表达，因而由分离提纯的方法获得的菌毛抗原量少，成本高，不适用于卵黄抗体的规模化生产。