[发明专利]唐氏综合征诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种可迅速确诊唐氏综合征的试剂盒。

背景技术

唐氏综合征是最先得到公认和最重要的严重染色体疾病之一。英国医生Langdon Down首先对该病进行了描述，故称为Down综合征。1959年，法国细胞遗传学家Lejeune证实此病的病因是多了一个小的G组染色体，后来确定为21号染色体，故也称为21三体。唐氏综合征的临床特征主要为生长发育迟缓、不同程度的智力低下和包括头面部特征在内的一系列异常体征，这使得该病在过去又不幸被称为先天愚型。新生儿中，21三体的发病率约为1/600-900，是新生儿中最为常见的染色体异常。95％Down综合征患者的染色体基础都是继发于减数分裂时染色体不分离所致的21三体，即全身体细胞均多了一条21号染色体，这类核型称为游离型，通常临床症状典型而且显著。通过DNA多态性分析，能够在大部分的家庭中判定不分离发生在双亲中的哪一方以及减数分裂的哪一步。额外的21号染色体多来自母亲的第一次减数分裂。大约4％的Down综合征是非平衡易位的结果，这种核型为易位型，患者虽然只有46条染色体，但因一条21号易位到另一条D组或G组的染色体上，加上正常的两条21号染色体，仍多了一条额外的21号长臂，而决定本病的关键区带为21号长臂，故临床上仍表现出21三体的症状。最后，不到3％的Down综合征患者是嵌合体，同时具有正常的和异常的两种细胞系，症状取决于异常细胞所占的比例，但一般较轻。目前，除了加强护理和训练，延长患者的寿命，增强其生活自理能力外，人类对于Down综合征并没有有效的治疗措施。此病的发生给患者家庭和社会都带来极大的负担。因此，提高产前诊断水平，减少Down综合征患儿的出生，非常重要。

对胎儿细胞进行核型分析是已有的生物非整倍体检测方法，这个过程包括胎儿细胞的体外培养和中期胎儿细胞的核型分析。细胞的体外培养需要一定数量的存活细胞和相当的专业技术知识，在下列几种情况下都可能无法实施核型分析：1、细胞培养失败。据统计，细胞培养失败的发生率约为1-2％。2、收集的细胞数目有限，不能得出明确的结论。为确保足够的培养物用于核型分析，必须获得大于5m1的羊水。当一次羊水穿刺抽出的羊水量少于5ml时，就不得不进行反复的羊水穿刺，从而增加了感染和损伤的风险。3、培养物被污染。有文献报道，即使在经验丰富的试验室，母体细胞的污染率也可达10-14％。4、由于细胞培养仅限于存活细胞，因此某些特殊的样本无法进行核型分析，如一些妊娠产物以及福尔马林固定或石蜡包埋样本。此外，传统的生物非整倍体的检测方法最为显著的缺点是细胞培养过程耗时太长，大致需要两周左右的时间，这就易于造成处理上的延误。因此，迅速、准确的检测技术非常有价值。

近年来，荧光原位杂交(fluorecent in situ hybridization，FISH)和定量荧光PCR(quantitative fluorecent polymerase chain reaction，QF-PCR)已经应用于生物非整倍体的检测。就荧光原位杂交检测生物非整倍体的方法而言，间期细胞的荧光原位杂交可不必进行细胞培养，大大缩短了诊断所需的时间；商业化探针的应用提高了FISH的敏感性和特异性。但另一方面，这项诊断技术仍然具有一定的局限性：1、在未培养的羊水中，荧光标记的探针会与细胞骨架非特异性地结合，使背景不清晰，FISH的有效性大大降低。2、必须要有完整的细胞用于分析。3、对实验人员的专业技能要求较高。4、母体细胞的污染会导致对实验结果的错误解释。5、相较QF-PCR，FISH分析耗时长、成本高，限制了其对样本的高通量检测。