[发明专利]检测鼠李糖乳杆菌的遗传标记和方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测或鉴定鼠李糖乳杆菌的方法。

背景技术

乳酸菌是一类可发酵碳水化合物、且主要生成乳酸的细菌的总称。目前，国际上已对乳酸菌进行大量的研究，并在实践上将乳酸菌应用于许多领域中。不同种的乳酸菌可起到不同的作用，例如，(1)在细胞表面形成优势菌群，对病原微生物产生抑制作用；(2)菌株分泌抗细菌物质；(3)菌株有助于消化活性；(4)产生抗癌活性物质等。

鼠李糖乳杆菌是乳酸菌的一种，目前现有技术中已经发现有多种鼠李糖乳杆菌。鼠李糖乳杆菌LV108是本申请人从广西巴马瑶族自治县和新疆和田地区长寿老人体内分离出一株具有优异的抗细菌特性的菌株，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC No.1531，多种试验表明，所述的鼠李糖乳杆菌LV108具有抗幽门螺旋杆菌和大肠杆菌等有害菌的能力以及抗氧化能力，具有耐受低pH值和胆汁酸盐的能力，并具有很强的消化道黏附能力(参见专利申请CN200510111588.9，公开日为2007年6月20日)，因此该菌株是一株具有极其优异的益生功效的鼠李糖乳杆菌。

由于不同种的乳酸菌的益生功效有很大不同，因此有必要对益生功效良好的菌株加以鉴定。目前现有技术中的菌株鉴定方法许多还是采用传统的形态学方法，或者观察其培养特征等。然而，传统的方法操作烦琐费时，准确性差，当样品量多时工作量极大；并且传统的方法往往局限于区分亲缘关系远的、形态学特征差异大的菌株，对于亲缘关系接近的、遗传相似度高的菌株常常难以区分。

因此，本领域需要找到可明确地定性功效良好的特定菌株(如鼠李糖乳杆菌)的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性检测鼠李糖乳杆菌LV108的遗传标记以及检测方法。

在本发明的第一方面，提供一种引物，所述的引物具有SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列。

在另一优选例中，以鼠李糖乳杆菌LV108基因组DNA为模板，以所述引物进行PCR扩增，扩增产物中含有650±10bp(优选的为约650bp)、500±10bp(优选的为约500bp)、和300±10bp(优选的为约300bp)的特异性DNA片段。

在本发明的第二方面，提供一种鉴定鼠李糖乳杆菌LV108的方法，所述方法包括：

以待测菌株的基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：19所示的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有650±10bp、500±10bp、和300±10bp的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌。

在另一优选例中，所述方法进一步还包括步骤：

以待测菌株的基因组DNA为模板，以具有SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有850±10bp(优选的为约850bp)的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌；和/或

以待测菌株的基因组DNA为模板，以具有SEQ ID NO：39所示核苷酸序列的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有800±10bp(优选的为约800bp)的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌；和/或

以待测菌株的基因组DNA为模板，以具有SEQ ID NO：30所示核苷酸序列的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有300±10bp(优选的为约300bp)的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌。

在另一优选例中，所述方法进一步还包括步骤：

以待测菌株的基因组DNA为模板，以具有SEQ ID NO：23所示核苷酸序列的引物和具有SEQ ID NO：30所示核苷酸序列的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有613±10bp(优选的为约613bp)的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌。

在另一优选例中，所述方法进一步还包括步骤：

以待测菌株的基因组DNA为模板，以具有SEQ ID NO：36所示核苷酸序列的引物和具有SEQ ID NO：37所示核苷酸序列的引物进行PCR扩增；若扩增产物中含有613±10bp(优选的为约613bp)、448±10bp(优选的为约448bp)、和150±10bp(优选的为约150bp)的特异性DNA片段，则该菌株是鼠李糖乳杆菌。

在另一优选例中，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物中的特异性DNA片段。

在另一优选例中，所述的待测菌株是乳杆菌。

在另一优选例中，所述的待测菌株是鼠李糖乳杆菌。

在本发明的第三方面，提供一种用于鉴定鼠李糖乳杆菌LV108的试剂盒，所述试剂盒中含有：