[发明专利]一种乳腺癌免疫缺陷型动物模型及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗评价、检测技术领域，具体地说涉及乳腺癌免疫缺陷型动物模型及其制备方法。

背景技术

在女性生殖系恶性肿瘤中，乳腺癌约占全身恶性肿瘤的7％～10％，发病率占妇科恶性肿瘤的第一位，全世界每年新发乳腺癌约150万例，死亡57万例。乳腺癌的发病在世界范围内呈明显上升趋势，无论在高发区还是低发区，乳腺癌发病率均以5-20％的不同速度上升。

乳腺癌动物模型被普遍应用于抗乳腺癌药物筛选和药效学研究，已有较多文献报道了现有的乳腺癌动物模型在抗乳腺癌药物筛选和药效学研究上的应用。乳腺癌动物模型的制作对研究乳腺癌的病因、发病机理，从而对其进行有效预防、提高治疗效果起到非常关键的作用，尤其在抗癌药物的药理研究中更为重要。

自发性和诱发性乳腺癌动物模型发生的条件比较自然，与人类患病过程更为相似，还有利于观察遗传因素及环境因素等对肿瘤发生的影响，但此模型肿瘤发生的潜伏期长，病程或癌块大小无法均一，成功率低，故均不适合乳腺癌治疗药物的药效学评价。

移植性乳腺癌模型的移植物来源于自发性或诱发性乳腺肿瘤细胞株，或人类乳腺癌细胞株。通过瘤细胞悬液注射、瘤组织小块接种等方法将肿瘤原位或异位植入动物体内。瘤株的建立过程，也是肿瘤在动物间反复传代的过程，大概经过20代以后，它的组织类型与生长特性已趋稳定，并能在同系或同种受体动物中继续传代，即成为一个可移植的瘤株。目前人类肿瘤的荷瘤动物模型研究较多的是移植瘤模型，以异种移植模型为主，移植方法包括组织块移植法，细胞种植法，肾包膜下移植法等。

目前用于移植的人乳腺癌细胞系有二十多种，主要包括MCF-7、BT-474、T47D、HBL-100、MDA-MB-435细胞等，其中应用较多的是MCF-7细胞。从生物学特性来考虑，由于大部分MCF-7细胞的雌激素受体均为阳性，其生长需要微量的雌激素来维持，但是动物体内的雌激素水平不足以维持其生长，故移植乳腺癌细胞以后，常常由于其激素水平过低而使肿瘤不长，或者体积过小，无法满足达到正常的试验要求。

解决激素水平过低的方法是给动物注射雌激素，以维持体内激素的水平，从而保证细胞在体内的生长。应用较多的是雌激素制剂为Innovative Research公司生产的17β-雌二醇(17β-Estradiol)缓释片剂，于实验前进行裸鼠皮下包埋即可。其优点是一次性皮下包埋即可保证整个实验周期，缺点是价格昂贵，以0.72mg/60天缓释片剂为例，每片高达785美元，这样，使得整个实验费用过高。另外，由于这种制剂有对动物有很严重的毒性反应，动物移植了此缓释片剂以后，常常导致动物瘦小，死亡率大大提高。

此外，由于排斥反应的存在，使人们想到，在移植前对动物进行环孢素A、放射线等免疫抑制的预处理，可以使动物处于轻度的免疫抑制状态，从而耐受人癌细胞。但是，这样的处理往往会影响到肿瘤的生物学行为，而且由于免疫抑制处理，使动物的死亡率明显增高，因而易导致实验失败。

早期的动物模型采用正常鼠，成瘤率低，目前采用较多的是人乳腺癌异种移植裸鼠肿瘤模型，但与人类自发乳腺癌的生物学特征尚有较大差距。另外，由于裸鼠仍具有体液免疫功能，不能进行免疫重建，不是乳腺癌的理想模型。

Nod-SCID(severe combined immunodeficent，严重联合免疫缺陷)鼠应用价值远高于裸鼠和SCID小鼠。目前已有许多人类肿瘤移植到Nod-SCID小鼠的报道，并证实Nod-SCID小鼠比裸鼠更适合于众多人类肿瘤生长、转移的研究。同时，Nod-SCID小鼠由于同时缺乏T细胞、B细胞和NK细胞，适合于在动物体内研究人类免疫细胞和人类肿瘤的关系，是理想的肿瘤及免疫功能重建的动物模型。尽管已有许多用Nod-SCID鼠重建人体免疫系统和移植人类肿瘤成功的报道，但迄今尚未见国内外有关MCF-7乳腺癌细胞Nod-SCID鼠移植模型的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种乳腺癌动物模型及其制备方法。

本发明一方面公开了一种制备乳腺癌免疫缺陷小鼠模型的方法，包括下述步骤：

1)免疫缺陷小鼠皮下注射雌二醇注射剂；

2)取体外培养生长良好的乳腺癌细胞，注射免疫缺陷小鼠；

3)定期注射免疫缺陷小鼠雌二醇注射剂，得到乳腺癌免疫缺陷小鼠模型。