[发明专利]肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变及其检测方法

权利要求书

1.一种肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变，其特征在于：PRKAG2基因第3外显子上第298位碱基发生G→A杂合突变。

2.根据权利要求1所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变，其特征在于：该突变导致编码的第100位氨基酸发生由甘氨酸(G)到丝氨酸(S)的错义突变。

3.肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变检测方法，包括下列步骤：

(1)提取外周血DNA；

(2)PRKAG2基因外显子的体外PCR扩增；

(3)DNA测序分析。

4.根据权利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变检测方法，其特征在于：所述的PCR扩增是指反应液为2μL 10×PCR Buffer、0.3μl的20μM引物、0.6μl0mM dNTP mix、1.2μL 25mM MgCl₂、1U Taq酶，加ddH₂O至20μl，20ng/μl DNA模板1μl，反应条件：95℃15分钟；94℃40秒，63℃1分钟，每个循环减0.5℃，72℃延伸，共10个循环；然后变性94℃40秒，退火57℃ 1分钟，延伸72℃，共30个循环；72℃延伸10分钟。

5.根据权利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变检测方法，其特征在于：所述的测序反应中的PCR反应体系包括测序引物、PCR纯化产物和荧光测序MIX，反应条件：94℃ 10秒预变性，94℃ 10秒，63℃5秒，68℃4分钟，35个循环，56℃延伸4分钟。

6.根据权利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突变检测方法，其特征在于：所述的PRKAG2基因外显子的PCR和测序引物序列见表1。

表1 PRKAG2基因外显子PCR和测序引物序列

    外显子    引物序列(5’→3’)    产物大小(bp)     1      2      3      4      5   Forward   Reverse  Forward   Reverse  Forward   Reverse  Forward   Reverse  Forward   Reverse    tgatttgcctacgagggttc     cgggcagagagagagattga    aaacacgtccacatcccttc     aggtgagctgtcgcaggat    ggtgctacctgcagaccatt     ctggaccagaaggattacgc    cctctgaccacctccaatgt     tctccctcagcctgtgattt    aagcgagaaaggatccccta     agttcggcgagtaaggacaa     539      373      700      559      926 

     6      7      8      9      10      11      12，  13      14      15      16     Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    Forward     Reverse    ctggcccttgatcatactgg     gaattcagataaaacctcagcaca    gaatcaattgagcccaggaa     caccctgccagcaagaat    gccaaattctctggttagttcc     tgtactgaagttccctgcatgt    cccaccttgatctcccaaa     gcctgctgaaggtgtcctat    tcttcaaatgcaacatcctga     atccatccttagcaccagca    tgtagcttgcacttgtatttgaga     agagaatgccgagttttgttg    tgttaattcaggcatccaggt     tggttgctaaaccaatgcag    acagtagcaatggcatgtcg     gttctgggacaggagggaat    gcaatcctcccaccaagtaa     tcctcactcacgcagaacac    ctgctccttcccacatcg     aagctcggtgttgtttcaca     391      377      474      449      467      580      874      468      491      600