[发明专利]一种生物碱的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及物质的分析方法，尤其涉及一种生物碱的分析方法。

背景技术

生物碱包括咖啡因、可可碱和茶碱，是茶叶及可乐等软饮料中常见的成分，由于许多生物碱有兴奋甚至制幻作用，其含量需要进行严格控制。传统的毛细管电泳分离方法，由于受到压力进样和落差进样等传统进样方式的限制，其定量重现性无法满足质量控制的需要。

高精度定量毛细管电泳仪是一种新型的微量分析仪器，它采用压力和电渗流驱动电解质溶液通过毛细管柱。样品以溶液状态进入毛细管柱，不同组份在高压电场的作用下，以不同的速度定向迁移，先后依次通过紫外检测器进行检测，根据各组分的迁移时间和响应值进行定性、定量分析。电泳的支持物是石英毛细管，采用纳升级定量进样阀，可实现高精度定量进样。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述现有技术存在的问题，提供一种高精度定量毛细管电泳仪的生物碱的分析方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种生物碱的分析方法，采用高精度定量毛细管电泳仪分析，所述的高精度定量毛细管电泳仪包含高精度微流液体输送泵、微流控制装置、进样阀、高压电源、电场隔离装置和紫外检测器，所述的生物碱的分析方法包括以下步骤：

A、制备样品溶液

准确称取咖啡因、可可碱和茶碱标准品各10mg，置于100ml容量瓶中，用5mM硼砂溶液溶解并稀释至刻度，作为样品溶液；

B、仪器准备

将高精度定量毛细管电泳仪各部分连接好，检查是否漏液，保证仪器的密闭性；打开紫外检测器电源，预热30min；打开高精度微流液体输送泵、高压电源和微流控制装置，调节电压为10kV，泵流速为0.05ml/min；

C、进样分析

从进样阀注入样品溶液进行分析，并采集图谱；

D、连续进样分析7次，记录保留时间和积分面积，并计算相对标准偏差。

步骤C中所述的进样分析的分析条件为：

毛细管柱：内径150μm，柱长70cm，有效柱长35cm；

流动相：5mM硼砂缓冲溶液；

检测波长：254nm。

本发明生物碱的分析方法由于采用高精度定量毛细管电泳仪进行分析，解决了传统毛细管电泳定量差的固有缺陷，三种生物碱达到基线分离，定性重现性RSD₇＜0.5％，定量重现性RSD₇＜1％。

附图说明

图1是本发明的分析方法所采用的高精度定量毛细管电泳仪的结构原理图；

图2是采用本发明的分析方法得到生物碱的图谱。

具体实施方式

本发明生物碱的分析方法，采用高精度定量毛细管电泳仪分析，这种高精度定量毛细管电泳仪的主要结构如图1所示，它包括流动相貯液瓶1和2、连接管3、高精度微流液体输送泵4和5、混合阀6、微流控制装置7、电场隔离装置8、定量进样阀9、高压电源10、分离毛细管11、紫外检测器12、高压导线13、高压电极14、三通15、连接管16和废液收集瓶17。

本发明生物碱的分析方法的步骤是：首先以咖啡因、可可碱和茶碱标准品为样品，制备出它们的混合溶液。分别准确称取咖啡因、可可碱和茶碱各10mg，置于100ml容量瓶中，用5mM硼砂溶液(pH9.0)溶解并稀释至刻度，作为样品溶液。在该样品溶液中，咖啡因、可可碱和茶碱的浓度均为1.0×10^-4g/ml。

将高精度定量毛细管电泳仪各部分连接好，检查是否漏液，保证仪器的密闭性。接着打开紫外检测器电源，预热30min；打开高精度微流液体输送泵，控制泵流速为0.05ml/min，开始输送流动相；打开高压电源，调节电压为10kV，并打开微流控制装置，控制流动相的流量和流速，至紫外检测器检测出流动相的稳定基线。然后从定量进样阀注入样品溶液进行分析。分析条件为：毛细管柱：内径150μm，柱长100cm，有效柱长60cm；流动相：10mM硼砂缓冲溶液；检测波长：254nm。采集三种生物碱的图谱，如图2所示。图2中17.12为咖啡因的谱峰，18.27为可可碱的谱峰，26.01为茶碱的谱峰。

为了证明本方法的效果，按照上述方法连续进样分析7次，分别记录保留时间和积分面积，并计算相对标准偏差RSD。实验结果表明，三种生物碱达到基线分离，定性重现性RSD₇＜0.5％，定量重现性RSD₇＜1％。