[发明专利]一种检测转基因品系特异性时品系特异性序列的扩增方法

权利要求书

1.一种在转基因生物品系特异性检测中扩增基因组品系特异序列方法，首先合成人工接头，分别在连接头上和基因组已知区域设计引物Primer S1、Primer S2，然后将基因组进行酶切，将酶切片段与此连接头连接，取连接产物做模板，以连接头引物和基因特异引物做PCR，步骤如下：

1)DNA的限制酶酶切反应：配制限制酶酶切反应液，反应3～5小时，回收DNA，并溶解于蒸馏水；

2)配制连接反应液：将步骤1)所得DNA溶液、接头、DNA连接酶、蒸馏水混合进行反应，回收DNA，并溶解于蒸馏水，加热；

3)进行1st PCR反应；

4)进行2nd PCR反应；

5)确认PCR反应产物。

2.根据权利要求1所述的扩增基因组品系特异序列方法，其特征在于：所述的转基因生物为：转基因玉米、转基因大豆、转基因油菜、转基因番茄或转基因棉花。

3.根据权利要求2所述的扩增基因组品系特异序列方法，其特征在于：所述的转基因生物为转基因玉米。

4.根据权利要求3所述的扩增基因组品系特异序列方法，其特征在于：引物Primer S1和Primer S2的序列为：

Primer S1 5′AGGGTCTTGCGAAGGATAGTGGGATTGTGCGTCAT  3′

Primer S2 5′CCTTTCCTTTATCGCAATGATGGCATTTGTAGGTG  3′

5.根据权利要求1所述的扩增基因组品系特异序列方法，其特征在于：步骤2)中所述的接头为Pst I接头、Sau3A I接头、Hind III接头、EcoR I接头、Sal I接头或Xba I接头。

6.根据权利要求5所述的扩增基因组品系特异序列方法，其特征在于：所述的接头和接头引物的序列为：

Sau3AI接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGA3′

              3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TAG OH 5′

EcoRI接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGAG AG 3′

             3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TCTTA A OH 5′

HindIII接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGAG A 3′

               3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TTCGA OH 5′

PstI接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGAG ACTGC A 3′

            3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TG OH 5′

SalI接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGAG AG

            3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TCAGC T OH 5′

XbaI接头：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA CTATA GGGAG AT 3′

            3′：CATGT ATAAC AGCAA TCTTG CGCAT TATGC TGAGT GATAT CCCTC TAGAT C OH 5′

接头PrimerC1：5′HO：GTACA TATTG TCGTT AGAAC GCGTA ATACG ACTCA 3′

接头PrimerC2：5′HO：CGTTA GAACG CGTAA TACGA CTCAC TATAG GGAGA 3′