[发明专利]盐藻中钠磷共转运通道1;2基因、其编码蛋白及其克隆方法无效
申请号: | 200710041200.1 | 申请日: | 2007-05-24 |
公开(公告)号: | CN101100669A | 公开(公告)日: | 2008-01-09 |
发明(设计)人: | 宋任涛;许政暟;管祯玮;孟祥宗 | 申请(专利权)人: | 上海大学 |
主分类号: | C12N15/31 | 分类号: | C12N15/31;C07K14/415 |
代理公司: | 上海上大专利事务所 | 代理人: | 何文欣 |
地址: | 200444*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 盐藻中钠磷共 转运 通道 基因 编码 蛋白 及其 克隆 方法 | ||
1.一种盐藻钠磷共转运通道1;2基因,其特征在于该基因具有SEQ NO 1所示的碱基序列。
2.一种根据权利要求1所述的盐藻钠磷共转运通道1;2基因编码蛋白,其特征在于具有SEQ NO 2所示的氨基酸序列。
3.一种根据权利要求1所述的盐藻钠磷共转运通道1;2基因的克隆方法,其特征在于该方法具有如下步骤:
a.根据NCBI GenBank DvSPT1(DQ286760)的基因组序列设计下列引物:5′ACTGGTCCACAGACAAGAAGG 3′与5′TCTCAGCATCACGAGCCATA3′;通过四维PCR筛选体系从盐藻BAC文库得到一个含有盐藻钠磷共转运通道基因的BAC克隆,并构建该BAC克隆的鸟枪文库;
b.从步骤a中构建的鸟枪文库中,大通量提取鸟枪文库的质粒DNA,在MegaBACE 4500上进行序列的测定;每个鸟枪质粒利用M13正反向引物,进行双向测序;共测序600个鸟枪文库质粒,即6块96孔板;
c.将上述的600个鸟枪文库质粒的原始数据输入在RedHat Linux平台的并联计算机群中,使用Phred/Phrap/Consed程序拼接所测序列,构建亚克隆并测序以填补出现在序列之中的缺口,得到一段连续的盐藻基因组序列;通过Blastn程序在该连续的盐藻基因组序列中,获得盐藻钠磷共转运通道1;2基因的全长基因组序列,长度为7973bp。
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