[发明专利]均相免疫分析纳米器件的构建方法

权利要求书

1、一种均相免疫分析纳米器件的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)碲氢化钠制备

将摩尔比为1∶4至4∶1的硼氢化钠和碲粉置于水中，在0-50℃下反应，生成碲氢化钠溶液；

(2)水溶性碲化镉量子点的合成

将0.00001-0.1摩尔/升氯化镉和水溶性巯基化合物混合配成溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0-10.0，通氮气除氧三十分钟后，搅拌并在氮气保护下，注入碲氢化钠溶液，形成碲化镉单体溶液；碲化镉单体溶液中二价镉离子∶碲氢化钠∶水溶性巯基化合物的摩尔比为2∶1∶4至2∶1∶8；控制碲化镉单体溶液的反应温度为70-140℃，反应时间0.5-20小时，得到发光范围在500到750纳米的碲化镉量子点水溶液；

(3)水溶性碲化镉量子点-抗原或抗体生物标记物溶液的制备

将0.001-5毫克/毫升碲化镉量子点、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐、抗原或抗体，置于0.01摩尔/升、pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中混合均匀，碲化镉量子点、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐、抗原或抗体的摩尔比为1∶100∶0.2至1∶1000∶6，将混合溶液于常温下避光反应2-4小时，采用超滤法纯化得到碲化镉量子点—抗原或抗体生物标记物溶液，置于4℃冰箱保存备用；

(4)过氧化物酶、抗体或抗原的共价连接

将0.001-4毫克/毫升过氧化物酶、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐、N-羟基丁二酰亚胺置于0.01摩尔/升pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中，混合反应15分钟，采用超滤法纯化此反应溶液，然后在此纯化了的溶液中加入0.001-3毫克/毫升抗体或抗原，过氧化物酶、乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐、抗体或抗原的摩尔比为1∶100∶0.2至1∶200∶5，将混合溶液于常温下避光反应1-2小时，采用超滤法纯化得到过氧化物酶-抗体或抗原生物标记物溶液，置于4摄氏度冰箱保存备用；

(5)基于抗原-抗体免疫反应，构建过氧化物酶-免疫复合物-碲化镉量子点生物纳米器件：

分别取5-50微升碲化镉量子点-抗原或抗体生物标记物溶液和过氧化物酶-抗体或抗原生物标记物溶液置于微型管中，然后用0.01摩尔/升、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液稀释至500微升，漩涡混合均匀，最后至37摄氏度恒温2-3小时，得到碲化镉量子点-抗原-抗体-过氧化物酶免疫纳米器件，或碲化镉量子点-抗体-抗原-过氧化物酶免疫纳米器件。

2、根据权利要求1的均相免疫分析纳米器件的构建方法，其特征在于所述抗原为牛血清白蛋白、癌胚抗原、α-胎甲球蛋白、降钙素、甲状腺蛋白、癌抗原CA 125、癌抗原CA 15-3或癌抗原CA19-9。

3、根据权利要求1或2的方法构建的均相免疫分析纳米器件，其特征在于该生物纳米器件由过氧化物酶、抗体或抗原、能量受体荧光纳米粒子组成。

4、根据权利要求3的均相免疫分析纳米器件，其特征在于所述能量受体荧光纳米粒子为水相合成不同尺寸的巯基丙酸修饰的碲化镉量子点，其发射波长为500-750纳米，量子产率为20-60％，其表面修饰有多个羧基(-COOH)，用于与蛋白质上的氨基(-NH₂)共价连接。