[发明专利]以中草药水提物为主要成分的痰液处理试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种以中草药水提物为主要成分的、在静止条件下就可对痰液进行体外处理的试剂，适用于脱落细胞学诊断及大规模肺癌普查，属医疗领域。

背景技术

利用气管、支气管分泌物(痰液)中的脱落细胞进行涂片镜检的方法，一直是对肺癌筛查的主要方法，此方法由于无损伤或损伤很小，故广泛用于肺癌普查工作。

目前临床的检测方式是取得痰液样本后，取其中一部分直接涂片镜检。由于痰液样本粘性物质多、流动性不好且细胞含量少，因而不可能将标本细胞有效收集于玻片上，而且涂片上存有大量粘液掩盖细胞极易产生漏诊或误诊。因此，若能将痰液样本进行液化处理使其具有良好的流动性，同时完好地保持细胞形态，这样就可以很容易地通过普通离心机进行离心处理而将全部细胞收集起来进行涂片。这样不仅可以增加镜下的细胞视野密度，同时也排除了粘液干扰，极大地提高了诊断率。

我国幅员辽阔，在同一季节南北温差很大，尤其在冬季温差可达40℃以上，这就需要痰液处理试剂本身具有较宽的使用温度范围和储运温度范围。同时，广大的临床单位尤其是一线的临床单位，所具有的硬件条件及资金投入能力往往相差很大，这就要求痰液处理试剂本身不仅成本低廉易于大规模普及应用，而且对使用条件要没有特殊要求且使用者无需培训即可使用。

现有的痰液体外处理方法多有缺陷，如：

1)酶化法：不仅因需要恒温和搅拌等辅助条件而使得操作麻烦，更因为本身对温度敏感而使储运的难度增加，同时，试剂成本较高也使得难于进行普查应用；

2)强碱处理法、机械搅拌法等：同样存在需特定温度条件或操作烦琐等不足；

3)中国专利公开号CN1168470A中，是将痰液收集于生理盐水中而后在4℃下、40000g离心处理：此法不仅因为试剂中无直接处理痰液的有效成分而使处理效率降低，而且能达40000g的离心机也不是广大临床单位通常配备的，更何况还有4℃的温度要求，因此这种方法不适合脱落细胞学诊断及大规模肺癌普查；

4)中国专利公开号CN1694726A中，是应用“天然硫氧还原蛋白”、“含有还原态硫氧还原蛋白的蛋白或肽”或者“编码硫氧还原蛋白的核酸分子”来对痰液进行处理：此法所应用的原料需用特定微生物或植物中精提再制成成品，这必然会提高综合成本并使生产工艺复杂化，更重要的是，此法所应用的原料对贮运温度及使用条件均有要求。实际上，此法更适用于对患者进行药物治疗，并不适合成为用于脱落细胞学诊断及大规模肺癌普查的体外处理试剂。与之相似的诸如半胱氨酸及其盐酸盐等成分也不适合成为用于脱落细胞学诊断及大规模肺癌普查的体外处理试剂。

发明内容

经发明人大量实验及筛选，发现中草药紫菀和竹茹按一定重量比且最佳重量比为等比例混合后的水提物在常温下对痰液具有良好的体外处理能力，而且原料易得、价格低廉、制备简单。如将制备好的水提液用诸如高效凹凸棒脱色吸附剂等进行脱色，即成无色澄明液体。

在此基础上，为痰液样本中的脱落细胞变形和破坏，本发明还配合以中性福尔马林磷酸盐缓冲液或等渗磷酸盐缓冲液对痰液样本中的脱落细胞进行固定和保护。

具体实施方式

本发明的具体实施例如下(配制100ml处理液)：

1)取中草药紫菀和竹茹各1g放于烧杯中，加入200ml蒸馏水，煮沸20分钟，冷却后加入粒度规格为200目的高效凹凸棒脱色吸附剂2g，搅拌，待水提液的颜色脱净后，将其用滤纸过滤，制成无色澄明液体备用；

2)将步骤1)中制备的水提液加热浓缩至20ml；

3)方法①取磷酸氢二钠0.65g，磷酸二氢钠0.4g，溶于50ml蒸馏水中，再取40％福尔马林10ml和步骤2)中的浓缩水提液10ml加入溶液中，混匀，再用蒸馏水滴定至100ml即可；

方法②取磷酸氢二钠0.166g，磷酸二氢钠0.757g，氯化钠0.2g溶于50ml蒸馏水中，再取步骤2)中的浓缩水提液10ml加入溶液中，混匀，再用蒸馏水滴定至100ml即可。

使用方法

将痰液样本收集至容器内，加入样本体积二倍量的本处理试剂，手摇震荡10-15下，在4℃至45℃的温度范围内静放2-10小时(放置时间依痰液样本的粘稠度而大致确定，粘稠度越低则放置时间越短)，用普通离心机以450g(约1500转/分)离心10分钟，倾掉上部液体，容器底部即为收集好的干净细胞团。最后用常规的黏附液如甘油蛋白液等涂片。