[发明专利]与黄瓜雌性性状相关的分子标记及其应用

权利要求书

1.与黄瓜雌性性状相关的分子标记，其特征在于该分子标记是黄瓜EIN3基因在153bp和501bp处发生的两个单核苷酸变异，见序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，这两个单核苷酸变异分别为G_153bp和A_153bp、T_501bp和A_501bp。

2.利用权利要求1所述的两个单核苷酸的变异设计的两组引物，其特征在于：上游引物3’端前6个碱基序列为3’ttg aag，为10～20个碱基组成的DNA片段。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于：它包括两组引物，其中引物组I上游引物具有序列表中SEQ ID NO.3所述的核苷酸序列，引物组I下游引物具有序列表中SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列，引物组II上游引物具有序列表中SEQ ID NO.5所述的核苷酸序列，引物组II下游引物具有序列表中SEQID NO.6所述的核苷酸序列。

4.一种获得黄瓜雌性性状分子标记的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)材料培养和黄瓜性别的鉴定；

2)黄瓜幼嫩叶片基因组DNA的提取；

3)根据EIN3或EIL基因mRNA的保守序列设计引物进行PCR扩增；

4)PCR产物的克隆测序及测序结果的比对分析；

5)根据序列比对结果设计两组引物引物，在亲本及F₂群体中进行验证。

5.根据权利要求4所述的获得黄瓜雌性性状分子标记的方法，其特征在于基因组DNA提取过程中分别用1％CTAB、5M KAc和1M NaCl处理。

6.根据权利要求4所述的获得黄瓜雌性性状分子标记的方法，其特征在于PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min、60℃退火1min、72℃延伸2min，共40个循环后于72℃延伸7min。

7.根据权利要求4所述的获得黄瓜雌性性状分子标记的方法，其特征在于用于群体验证的上游引物3’端前6个碱基序列为3’ttg aag，为10～20个碱基组成的DNA片段。

8.根据权利要求4所述的获得黄瓜雌性性状分子标记的方法，其特征在于用于群体验证的两组引物分别为：由序列表中SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4构成的引物组I和由序列表中SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6构成的引物组II。

9.黄瓜EIN3基因的分子标记在选择育种上的的应用，其特征在于：EIN3基因上带有G_153bp和T_501bp分子标记或两者之一的植株均为纯雌株。

10.黄瓜EIN3基因的分子标记在选择育种上的应用，其特征在于：通过引物组I可特异性扩增得到一条382bp大小的条带；或通过引物组II可特异性扩增得到一条605bp大小的条带，即可判定该黄瓜植株为纯雌株。