[发明专利]沙门氏菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种微生物显色培养基、检测试剂盒及检测方法，属于食品微生物安全监测领域。

【背景技术】

“民以食为天”，食品是人类赖以生存的物质基础，食品安全是关系人类健康和社会发展的重大问题。近年来，国内外食品安全的恶性事件不断发生。食源性致病菌是指以食物为载体，导致人类发生疾病的一大类细菌。据统计，发达国家每年约有1/3的人患食源性疾病，美国每年约有7600万例食源性疾病患者，全世界每年约有220万人因患食源性疾病而丧生，而且，食源性疾病常常是发展中国家导致人非正常死亡的主要原因。由此可见，食源性疾病已成为国内外普遍关心的问题。

沙门氏菌(Salmonella)是人类常见的重要食源性致病菌之一，是人和动物肠道中最主要且数量最多的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。

为有效控制病原的发生和扩散，准确及时的检测手段是预防和控制沙门氏菌传播的关键。目前，沙门氏菌传统的检测方法需要分离培养、镜检观察、生化鉴定等多个步骤，检测周期长，整个过程大约4-7天，且操作复杂，已不能满足食品中病源菌快速检测的现实需要，而且当有其它的肠道菌群存在时会影响沙门氏菌在传统SS培养基和DHL培养基中的检出。近年来，快速检验法中的PCR法、金标试纸法、免疫法和特异性的显色生化鉴定技术等快速检验方法，已在不断得到扩大应用，使沙门氏菌的快速检测有了很大发展。但是这些技术也存在一定缺陷，如技术要求高，设备操作复杂，需要专业的技术人员进行操作，以及检测费用昂贵等。

针对以上不足，以显色培养基为基础的特异性显色生化鉴定技术在当前能更好地与传统方法相接轨，检测成本较低。显色生化鉴定技术的原理是使用适当的显色底物，在细菌特异性酶作用下，显示一定颜色，直接观察菌落颜色的快速分析法，可以把检测、计数和鉴定一次完成。应用显色酶底物来检测微生物专一性和特异性的方法，推动了食源性致病菌的鉴定以及早期筛选培养基一系列技术的发展。这些基于酶的试验方法具有简便、快速、准确和检出率高的优点，在临床诊断及食品微生物检验中，显色培养基以其独具的优势与传统的培养基展开了竞争，从而引发了显色培养基开发和应用的热潮。国外的显色培养基研究起步很早。目前法国CHROMagar公司、意大利的Biolife公司、英国的Biolog公司和法国的BioMerieux公司已开发出沙门氏菌显色培养基，但是这些进口显色培养基价格昂贵，检测成本很高，且购买不方便，国内一般基层机构和企业很少采用。

【发明内容】

本发明旨在针对传统方法的不足，提供一种特异性高、检测周期短、成本低、可操作性强，适用于处理大通量样本的沙门氏菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法。

所述的沙门氏菌显色培养基，其配方为：蛋白胨20～30g、酵母膏粉3～7g、氯化钠4～7g、胆盐0.1～0.5g、琼脂12～15g、混合显色底物M-galactoside 0.05～0.95g、Na₂CO₃ 0.02～0.04g、选择性添加剂0.01～0.05g。

上述显色培养基优选的配方为：蛋白胨25.6g、酵母膏粉3g、氯化钠5g、胆盐0.1g、琼脂13g、混合显色底物M-galactoside 0.75g、Na₂CO₃ 0.02g、选择性添加剂0.03g。

所述的沙门氏菌检测试剂盒，其组成为：上述沙门氏菌显色培养基、增菌液A和B。

其中，增菌液A为高压灭菌处理后的缓冲蛋白胨水培养基(BP)；

增菌液B为高压灭菌处理后的四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)。

所述的沙门氏菌检测方法，其具体步骤为：

(1)制备显色平板：每1000mL蒸馏水或去离子水中加入42～60g显色培养基干粉，搅拌加热煮沸至完全溶解，待冷至40～50℃，倒平板，备用；

(2)样品前处理：按国标法(GB/T 4789.4-2003)对食品样品进行前处理；

(3)一步增菌(非选择性增菌)：将处理过的样品25g置于225mL增菌液A中，混合均匀后37℃培养6～8h；

(4)二步增菌(选择性增菌)：取一步增菌液1mL加入到9mL增菌液B中，混合均匀后37℃培养18～24h；

(5)接种培养：将二步增菌液接种显色平板上，37℃培养18～24h；