[发明专利]一种分离的李斯特单核增生菌噬菌体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及到能够特异性裂解李斯特单核增生菌(Listeria monocytogenes)菌株的噬菌体分离物和其作为生物杀菌剂在食品及在抗感染中的应用。属于生物工程领域。

背景技术

李斯特菌是近十几年来报道较多的病原菌之一，该菌分布十分广泛，且该菌在4℃时仍能够缓慢生长。食品是该菌致病的主要载体，肉类，蛋类，禽类，海产品，乳制品，蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人，免疫功能缺陷者。由该菌引起的人畜共患性疾病已成为全球性疾病。在西方国家，李斯特菌的感染最近呈上升趋势，曾经在美国、加拿大、法国等国家引起严重的食品中毒事件，已成为一个典型的环境卫生问题。

最新资料表明，北京零售鲜肉和蒸煮肉制品上李斯特单核增生菌的污染率分别为8％和4％。李斯特单核增生菌已在许多类型的西式肉制品如法兰克福香肠，咸牛肉和蒸煮火腿中检出。欧洲和加拿大的即食肉制品中其检出率在13％到50％之间.在速冻食品中李斯特菌污染率较高达14.3％，随着我国现代化食品加工业的发展，一旦存在此菌的污染源，就可导致大量产品的污染.由于李斯特菌其低温增值的特性，容易达到感染的菌量。

目前防治细菌感染的传统方法主要为大量使用抗生素和添加化学杀菌物质。广泛应用抗生素非但成本高而且已经催生很多超级耐药细菌，而应用化学制剂杀菌不但对环境造成污染，且对人类健康造成危害。

噬菌体(bacteriophage，phage)是一种细菌病毒，可以特异性感染并裂解一种或少数几种细菌。一类噬菌体感染细菌后将其遗传物质整合到细菌的DNA里，随着细菌的繁殖而繁殖，一旦外界条件合适就裂解细菌细胞，而引起细菌死亡，这种噬菌体叫做温和噬菌体。另一类噬菌体一旦感染细菌，就利用细菌合成子代噬菌体，然后裂解细菌细胞而释放，这种噬菌体成为烈性噬菌体。噬菌体有严格的宿主特异性，只寄居在易感宿主菌体内，对动植物细胞和其它细菌没有感染性。因而噬菌体是安全的。

发明内容

本发明的一个目的是开发对李斯特单核增生菌具有强烈裂解作用的噬菌体分离物，该分离物可以单独或混合使用可以特异性的部分或完全灭活李斯特单核增生菌，为工业化生产噬菌体杀菌剂提供噬菌体株来源。

本发明的另一目的是开发一种新型的安全的生物杀菌剂作为食品添加剂防止由李斯特单核增生菌引起的食品污染，避免由于食用该菌污染的食品引起的细菌感染。

本发明的又一目的是提供一种用于食品特别是方便即食产品生产环境的安全的生物净化杀菌剂用以防止食品加工过程中造成的李斯特单核增生菌污染。

本发明的再一目的是为治疗由李斯特单核增生菌引起的感染提供潜在治疗药物。

本发明从自然界中分离得到噬菌体分离物，该噬菌体分离物包括一种或多种对李斯特单核增生菌具有裂解作用的噬菌体，经纯化可得噬菌体单体。证明该噬菌体分离物中的噬菌体单独或混合使用对李斯特单核增生菌具有实质裂解作用。上述分离出的噬菌体单体(单增李斯特菌噬菌体，拉丁名Listeria Monocytogenes Bacteriophage)命名为BPH-LM-1对李斯特单核增生菌均有广谱的杀菌能力。噬菌体BPH-LM-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(地址：北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所)，保藏日期2007年11月13日，保藏编号2254。

本发明中噬菌体BPH-LM-1经小鼠毒理实验，给予10¹¹pfu/kg的噬菌体样品对实验小鼠未见异样，连续给予15天后，将小鼠断颈处死，尸检，违发现其内脏有异样变化。与其他实验结果相同。该噬菌体是安全的。

本发明中噬菌体BPH-LM-1可以单独或混合使用，在液体中的杀菌极限为终浓度7×10⁵pfu/ml，即，在对数生长期内的李斯特单核增生菌中加入该噬菌体单体或混合物，可以在4-6h内完全灭活该菌。本发明中噬菌体可应用于液体食品，包括但不限于乳制品、饮料等防止李斯特单核增生菌的污染。

本发明中噬菌体BPH-LM-1可以单独或混合使用，对被李斯特单核增生菌污染的固体食品表面喷洒10⁶pfu/ml-10⁷pfu/ml数量级的噬菌体，10⁸pfu/ml-10¹¹pfu/ml的效果尤佳，可以在24小时内完全灭活李斯特单核增生菌。且在一个月内李斯特单核增生菌检验呈阴性。提示：本发明中噬菌体可应用于防止固体食品，包括但不限于方便即食产品的李斯特单核增生菌污染。