[发明专利]用清洁方法从喜树果中提取白桦脂酸等有效成分

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物有效成分的提取方法，具体涉及一种从喜树果中提取白桦脂酸、羟基喜树碱和喜树碱的方法。

背景技术

白桦脂酸是一种三萜类化合物，具有抗肿瘤细胞增长的作用，并且在抗艾滋病方面还有许多新的作用机制，这使白桦脂酸成为很有开发前景的药物，引起了人们的广泛关注。Franoise等发现一些新的桦木酸的X-氨基链烷酸衍生物具有抗艾滋病的作用，它可以抑制在CEM4和MT-4细胞中的HIV-1发生细胞病变，并且不会影响到HIV-1逆转录酶或蛋白酶的活性，这是目前所发现的其他抗艾滋病药物不具备的药理活性，因此具有重要意义。

目前白桦脂酸的制备方法主要有三个途径：1、直接提取法。其中Carcache Blanco Ziziphusspina等是目前此途径的主要的代表，主要是从其他植物的树叶树枝中提取，原料消耗量大，成本高，所得到的白桦脂酸杂质含量会比较高，且不易除去。2、一步合成法。一步合成法是将桦木醇的提取和桦木酸的制备同步进行，它通过将植物浸软而使提取和转化在一步内完成，可以用氯仿、二氯甲烷、二乙基醚、四氢呋喃、丙酮、吡啶和DMF等有机溶剂来提取桦木醇，同时将硝酸铁、硝酸铜、硝酸铬、硝酸锌等氧化剂附着在硅胶、氧化铝、胶岭石K-10等固体载体上对提取物进行氧化，最后得到白桦脂酸。此法所制得的混合物产品杂质的种类和含量很多，给分离纯化带来困难，从而导致产率下降。3、半合成法。这种方法是从植物中提取出桦木醇，然后由桦木醇经过一系列化学反应制得桦木酸。由于桦木醇在植物中的含量比桦木酸高，并且经过化学合成的方法制得的桦木酸产率较高，分离提纯也比较容易，所以这种方法得到广泛的应用。但这种方法反应路线较长，反应条件苛刻，有异构体的产生，但路线较长，不适于大规模生产。

喜树(Camptotheca acuminate Decaisne，简称CPT)，珙桐科(Nyssaceae)喜树属(Camptotheca)多年生植物，落叶大乔木。1966年美国的Monroe E.wall从喜树的皮中分离出喜树碱，经肿瘤试验证明这种色氨酸一萜烯类生物碱具有抗癌活性，从而引起人们的广泛关注。喜树果中已经发现有20多种有特殊药效的化合物，其中就包括有白桦脂酸。

综上所述，目前提取白桦脂酸及喜树碱的方法中所使用的试剂大多数都是毒性较大的药品，如氯仿，石油醚，甲醇等，其过程繁琐，设备要求高，生产成本高。而从喜树果中采用清洁的方法提取白桦脂酸的技术未见报道，尤其是能同时分离提取喜树碱，羟基喜树碱等有效成分的方法，如果能实现这种方法，对于白桦脂酸、喜树碱和羟基喜树碱的研究有着重要的意义，对于充分利用我国喜树资源也有着重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种用清洁方法从喜树果中提取有效成分白桦脂酸、并且能同时分离得到喜树碱、羟基喜树碱等有效成分的方法。

本发明的技术方案是提供一种用清洁方法从喜树果中提取白桦脂酸等有效成分的方法，以喜树果为原料，利用聚酰胺柱层析和乙醇洗脱的方法提取白桦脂酸、喜树碱和羟基喜树碱。

所述方法包括以下步骤：

(1)喜树果粉碎、用工业乙醇浸泡、过滤得到的澄清浸出液；

(2)浓缩澄清浸出液，避光低温保存；

(3)聚酰胺柱吸附；

(4)滴入解吸液解吸，分段收集过柱液，重结晶。

步骤(1)所述的用工业乙醇浸泡是用工业乙醇浸泡过面，浸泡5天。

步骤(2)所述浓缩采用旋转蒸发器对浸出液进行浓缩。

步骤(3)所述聚酰胺柱吸附是取大约5ml浓缩液上聚酰胺柱，缓慢加入使其充分渗透进入聚酰胺柱中，液面与聚酰胺齐平。

所述聚酰胺柱采用湿法装柱，是取250ml的聚酰胺置于500ml的大烧杯中，加入95％的优质工业乙醇至300ml，在电热套中煮沸半小时后取出，离心除去剩余的乙醇，再次加入95％的优质工业乙醇至300ml再煮沸半小时，离心除去剩余乙醇装入层析柱。

步骤(4)所述滴入解吸液是逐滴加入解吸液，浓缩液被聚酰胺充分吸收后，增大加入量，最后解吸液的用量约为3倍床体积。

所述解吸液是60％的乙醇水溶液。

步骤(4)所述分段收集过柱液是采用三角瓶分5段依次收集并编号，每瓶收集约50mL。

本发明的有益效果是：