[发明专利]化妆品中倍他米松的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明是一项利用高效液相色谱仪检测化妆品中禁用成分一倍他米松(Betamethasone)的新技术，尤其适用于化妆品中倍他米松的定性及定量分析。

背景技术

倍他米松属于肾上腺皮质激素类药物，具有抗菌、消炎的作用。国家卫生部颁布的2002年版《化妆品卫生规范》规定，化妆品中不得添加倍他米松。倍他米松由于其广谱高效的杀菌作用，被添加到祛痘类产品以达到消炎、祛痘、除螨及抗粉刺的目的。但这种药物的不良反应较多，有滁钠作用，对生长的抑制作用较强；还能引起皮质类固醇激素引起的各种不良反应，如肌肉骨骼、胃肠道、皮肤、神经系统、内分泌系统的异常和水电解质紊乱等。鉴于以上这些不良反应，长期使用添加有倍他米松的化妆品或皮肤性接触此种药物可严重影响人体健康。

目前关于倍他米松检测的文献报道大都是针对倍他米松原料和药品中倍他米松的检测方法，主要有旋光法、分光光度法、高效液相色谱法等。旋光法影响因素较多，需要标准对照品和样品的量较多，不适宜微量倍他米松的分析；分光光度法操作繁琐，样品处理过程中损失较多，且检出限较高，重复性较差；高效液相色谱方法是近几年检测倍他米松较常用的方法，但也仅仅局限于原料药和各种药品制剂中含量的检测，由于药品组分较少，基质简单，干扰因素较少，且样品预处理简单目标检测物损失小，因此药品中倍他米松的含量容易检测。而化妆品、饲料、肉类中的倍他米松含量的检测国家还没有制定相关的检测标准和方法，并且到目前为止化妆品中倍他米松的检测也没有相关的文献报道。与药品不同，化妆品种类繁多有膏、霜、乳、粉、水、啫喱、凝胶等多种剂型，并且基质复杂，各成分的理化性质差别较大，干扰因素较多，尤其是倍他米松作为化妆品禁用成分添加到化妆品中，其含量较低，用上述的旋光法、分光光度法很难准确的检测出化妆品中微量的倍他米松成分。因此，针对现有倍他米松检测技术上的不足，我们设计了一种用高效液相色谱方法检测化妆品中倍他米松的方法，该方法操作简单，专属性好，灵敏度高，且适宜化妆品中倍他米松的微量检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测化妆品中倍他米松的分析方法，该项技术利用高效液相色谱仪不仅可以对化妆品中的倍他米松进行准确的定性分析，而且还可以进行微量的定量分析。

本发明针对倍他米松的理化性质用一定浓度的甲醇-盐酸混合液或乙腈-盐酸混合液提取化妆品中的倍他米松，然后将提取液过滤，滤除固体杂质，直至滤液澄清，取制备好的样液上机，用甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行洗脱分离。所用高效液相色谱仪的主要配置包括十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18柱或C8柱、二极管阵列检测器或紫外检测器。

本发明方法的主要分析步骤如下：

1样品预处理

称取一定量的化妆品(乳、膏、霜或水剂)于10ml刻度离心管中，加入6ml左右的提取液(甲醇∶0.01～1.00mol/ml盐酸＝20～80％∶80～20％或乙腈∶0.01～1.00mol/ml盐酸＝20～80％∶80～20％)，涡旋混匀使基质充分分散，定容至刻度，再超声提取15-30min，将提取液转移至Eppendorf管中冰浴30min使基质析出，12000rpm/min离心5min，如果有必要可以再用0.45μm滤膜过滤。

2色谱条件

(1)色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C18或C8柱；

(2)检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器；

(3)检测波长：选用190-380nm波长作为检测波长；

(4)流动相：采用甲醇∶水＝20～80％∶80～20％或乙腈∶水＝20～80％∶80～20％混合液作为流动相，平衡色谱柱约20min，使基线平稳，该条件下保留时间适合，峰形对称，分离度好(R＞1.5)。

(5)流速：0.5～1.5ml/min；

(6)柱温：15～35℃。

3浓度计算方法

用倍他米松标准物质配制成一定梯度浓度的标准溶液，取20μl进样，按外标法，以峰面积-浓度作线性回归，得出线性回归方程，利用该方程和测得的样品中倍他米松的峰面积计算样品中倍他米松的含量。

4样品检测

(1)按照1中的方法进行样品预处理，取处理好的样品20μl进样；然后再取适当浓度的倍他米松标准溶液20μl进样。