[发明专利]一种蛋白或多肽抗原的修饰方法及应用无效
| 申请号: | 200710027524.X | 申请日: | 2007-04-12 |
| 公开(公告)号: | CN101077884A | 公开(公告)日: | 2007-11-28 |
| 发明(设计)人: | 杜军;蔡绍晖;张田甜;卜宪章 | 申请(专利权)人: | 中山大学 |
| 主分类号: | C07K2/00 | 分类号: | C07K2/00;A61K38/02;A61P35/00;A61P37/02 |
| 代理公司: | 广州粤高专利代理有限公司 | 代理人: | 林丽明 |
| 地址: | 510080广东省广州*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 蛋白 多肽 抗原 修饰 方法 应用 | ||
1、一种蛋白或多肽抗原的修饰方法,其特征是采用1-甲基色氨酸作为修饰剂,保护氨基后,在缩合剂的作用下与蛋白或多肽抗原缩合反应,再脱去保护基得到经修饰的蛋白或多肽抗原。
2、根据权利要求1所述的修饰方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)FMOC法实现1-甲基色氨酸的氨基端的保护;
(2)1-甲基色氨酸羧基的活化及在缩合剂DIC和HOBT的作用下与蛋白或多肽抗原的缩合;
(3)步骤(2)反应产物的脱保护;
(4)测定保护基FMOC的浓度以确定1-MT与被修饰蛋白或多肽抗原的连接率,由SDS-PAGE聚丙酰胺蛋白电泳检测被修饰后蛋白或多肽抗原并定性判断产物的溶解性。
3、根据权利要求2所述的修饰方法,其特征是步骤(2)1-甲基色氨酸羧基的活化是通过活化剂与1-甲基色氨酸反应使其羧基转化为活泼的酸酐,活化剂选用1-羟基苯并三唑HOBT、N,N-2异丙基碳二亚胺DIC,缩合反应时间为10-20小时。
4、根据权利要求3所述的修饰方法,其特征是缩合反应时间为12小时。
5、根据权利要求2所述的修饰方法,其特征是步骤(3)是将步骤(2)反应产物经12000rmp,时间为5min的离心操作得到底层固体,称重后加入到含体积百分比浓度为20%哌啶的DMF溶液中搅拌20min,再经离心操作得到经修饰的蛋白或多肽抗原。
6、一种用权利要求1或2所述方法修饰的蛋白或多肽抗原的应用,其特征是在制备抑制肿瘤或促进机体免疫作用药物中的应用。
7、根据权利要求6所述的应用,其特征是在制备修饰疫苗方面的应用。
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