[发明专利]化妆品中克林霉素的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明是一项利用高效液相色谱仪检测化妆品中克林霉素的新技术，尤其适用于化妆品中微量抗生素-克林霉素的定性及定量分析。

背景技术

克林霉素(Clindamycin)为大环内酯类抗菌药物，作为一种广谱高效的抗菌药物被广泛应用到药品、饲料、和化妆品中。克林霉素对厌氧性菌有较强的抑制作用；对敏感革兰阳性菌也有相当的抑制作用。由于其广谱高效的抑菌作用，克林霉素被一些化妆品生产厂家，添加到祛痘类产品以达到消炎、祛痘、除螨及抗粉刺的目的。但这种药物同时也存在着很多不良反应，如：容易引起伪膜性肠炎，容易导致肠道菌群失调，对神经肌肉有阻滞作用，并且克林霉素耐药性在国内外都已比较明显，不利人类疾病的治疗。因此，为保护化妆品消费者的健康安全，建立灵敏、准确、快速的化妆品中克林霉素的检测方法是十分紧迫和必要的。

目前药品中克林霉素的检测方法主要有微生物检定法、紫外分光光度法、气相色谱法、旋光法、毛细管电泳高频电导法、线性扫描伏安法。微生物检定法是《中国药典》(1990年版)规定的检测药品中克林霉素的方法，该方法周期长，操作繁琐，影响因素较多，灵敏度低，很难反映样品中克林霉素的真实浓度。紫外分光光度法、气相色谱法虽然灵敏度高，但这两种方法都需要油水两相萃取分离，操作繁琐，目标成分损失较大，不利于微量组分的检测。旋光法对环境条件要求较高，特别是温度的变化对其影响较大。毛细管电泳高频电导法和线性扫描伏安法灵敏度低，但步骤复杂，影响因素较多，重现性较差。高效液相色谱方法是目前检测克林霉素药品较常用的方法，但也仅仅局限于各种克林霉素药品制剂的含量检测，而化妆品、饲料、肉类中的克林霉素含量的检测还没有出台相关的标准或方法，由于药品组分较少，基质简单，干扰因素较少，且样品处理简单，目标检测物损失小，因此药品中的克林霉素易于检测。与药品不同，化妆品种类繁多，基质复杂，各成分的理化性质差别较大，干扰因素较多，尤其是克林霉素作为化妆品禁用成分添加到化妆品中，其含量较低，以上所述各种方法很难准确的检测出化妆品中微量的克林霉素成分，而且使用高效液相色谱检测化妆品中的克林霉素的方法还没有文献报道。针对以上现有技术的不足，我们设计了一种用高效液相色谱方法检测化妆品中克林霉素的方法，该方法效率高，专属性好，灵敏度高，且样品预处理简单。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测化妆品中克林霉素的分析方法，该项技术利用高效液相色谱仪不仅可以对化妆品中的克林霉素进行准确的定性分析，而且还可以进行微量的定量分析。

本发明是用无水甲醇或乙腈提取化妆品中的克林霉素，经超声萃取、离心、过滤等一系列操作，滤除固体杂质，直至滤液澄清，取制备好的样液上机，用磷酸二氢铵-乙腈缓冲溶液或磷酸二氢铵-甲醇缓冲溶液进行洗脱分离，在190-380nm波长下采集数据进行分析。所用高效液相色谱仪的主要配置包括十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C8或C18柱、紫外检测器或二极管阵列检测器。

本发明方法的主要分析步骤如下：

1样品预处理

称取一定量的化妆品(乳、膏、霜或水剂)于10ml刻度离心管中，加入4-7ml无水乙腈或甲醇(与流动相保持一致)，涡旋混匀使基质充分分散，定容至刻度，再超声提取15-30min，将提取液转移至Eppendorf管中，12000rpm/min离心5min，如果有必要可以再用0.45μm滤膜过滤。

2色谱条件

(1)色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱C8或C18柱；

(2)检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器；

(3)检测波长：选用190-380nm波长作为检测波长；

(4)流动相：采用0.01-0.50mol/L磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH值为4.0-8.0)∶乙腈＝40～80％∶60～20％缓冲溶液或0.01-0.50mol/L磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH值为4.0-8.0)∶甲醇＝40～80％∶60～20％缓冲溶液作为流动相，平衡色谱柱约20min，使基线平稳，该条件下保留时间适合，峰形对称，分离度好(R＞1.5)。

(5)流速：0.5～1.5ml/min；

(6)柱温：15～35℃。

3浓度计算方法

用克林霉素标准物质配制成一定梯度浓度的标准液，20μl体积进样，按外标法，以峰面积-浓度作线性回归，得出线性回归方程，利用该方程和样品中克林霉素的峰面积计算样品中的克林霉素含量。

4样品检测