[发明专利]麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用

说明书

一、技术领域

本发明涉及麦冬皂苷D在制药中的新用途，具体地说是涉及麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞周期基因药物中的应用，属中药技术领域。

二、背景技术

1.麦冬通过保护血管内皮细胞来完成养阴行血之功效

麦冬为临床滋养阴液的常用之品，是养阴生津的代表药物之一。麦冬，百合科植物麦冬Ophiogon japonicus(Thumb.)Ker-Gawl.的干燥块根。主要含多种糖甙：麦门冬皂苷B、D，23，24二羟基罗斯考皂，麦冬甙元-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖甙，甲基麦冬黄烷酮A、B，麦冬黄烷酮A、B，6-醛基异麦冬黄烷酮A、B，麦冬甙元，丙三醇以及β-谷甾醇、豆甾醇。另含挥发油，从中分得长叶烯、α-广藿香烯、β-广藿香烯、香附子烯、愈创奥烯、α-律草烯、樟脑、芳樟醇等成分。麦冬始载于《神农本草经》，味甘、微苦，性微寒，归肺、胃、心经。具有养阴生津、润肺清心的功效。

前期研究发现养阴代表中药麦冬的药物血清胚层有效部位群/组分/成分，具有不同程度的保护血管内皮细胞的作用，其中正丁醇部位的药效作用更为显著，以标准品麦冬皂苷D为对照进行高效液相分析发现，其中含有麦冬皂苷D成分。

2.麦冬皂苷D的研究进展

沿阶草属麦冬主产于四川绵阳，三台和浙江慈溪，萧山等地。杭麦冬与川麦冬的总皂苷的含量差异与栽培年限相关，杭麦冬生长周期为2～3年，川麦冬的栽培期为1年。不同产地麦冬的单体成分麦冬皂苷B、D含量也有较大差别，杭麦冬主含麦冬皂苷B、含少量皂苷D；而川麦冬主含麦冬皂苷D、含少量皂苷B。

研究发现麦冬皂苷D可显著抑制静脉血栓模型大鼠早期外周血中性粒细胞活化、粘附；减轻血栓重量；降低血清sICAM-1含量；其副作用低；麦冬皂苷D还可下调大鼠静脉血栓部位TF蛋白表达，并抑制MAPKp38和JNK磷酸化，提示麦冬皂苷D可通过影响上述信号通路，降低炎症反应，抑制血栓形成。另麦冬皂苷有显著性的抗炎作用，鲁斯可皂苷元和麦冬皂苷D为其中的两种活性成分。

同种不同产地样品中麦冬皂苷D的含量有较大差别，浙江产麦冬含量较低，四川产麦冬含量较高。对浙江产麦冬、四川产麦冬不同批次样品测定，发现麦冬皂苷D的含量差别较大，且同一产地浙江产麦冬中麦冬皂苷D的含量相差更大。生长年限对麦冬皂苷D的含量有一定的影响，年限长，含量略有增加。因此麦冬皂苷D含量的高低仅仅可作为川麦冬质量指标，而不适合作为浙麦冬质量的指标。

由于皂苷为一类极性较大，结构复杂的化合物，它无紫外吸收，无专一显色剂，再加上麦冬皂苷测定经常受糖的干扰，若采用紫外检测末端吸收法，则灵敏度低，且有干扰峰，无法使用。因此，我们采用比色法测定麦冬总皂苷含量为0.2855％，利用HPLC-ELSD法测定麦冬皂苷D的含量为0.03229％。为进一步获取其内在成分的信息，我们进行了ESI-TOF-MS测试，以ESI正离子为麦冬皂苷主要电离方式，乙腈-水梯度洗脱，205nm为检测波长提取紫外色谱图，确定35.52min为麦冬皂苷D，其裂解方式为先脱去与岩藻糖(1→2)连接的鼠李糖及(1→3)连接的木糖，后脱去岩藻糖。采用两种测试方法全面综合分析麦冬皂苷D。

3.麦冬皂苷D的提取分离

取5~10目麦冬药粉，加10倍量70％乙醇，热回流提取3次，每次2h。合并提取液，减压浓缩至无醇味。然后，将其溶于1000mL水中，用3倍量乙酸乙酯振摇提取3次，得到乙酸乙酯提取物和水层。将水层继续用3倍量正丁醇振摇提取3次，得到正丁醇提取物和水层，合并正丁醇液，用0.1mol/L NaOH振摇提取2次，弃去0.1mol/L NaOH。将正丁醇提取物进行大孔树脂柱洗脱，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇和乙醇梯度洗脱，分别得到相应的洗脱物。60％乙醇洗脱物经硅胶柱色谱，水饱和正丁醇洗脱，得到麦冬皂苷D。

三、发明内容

本发明的目的在于提供麦冬皂苷D在制药中的新用途，具体地说是提供麦冬皂苷D在制备调控血管内皮细胞信号转导基因药物中的应用。

保护血管内皮细胞是防治心脑血管病症的重要环节