[发明专利]用于禽流感灭活抗原的鼻腔免疫复合佐剂

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种用于禽流感灭活抗原的鼻腔免疫复合佐剂，属于生物技术领域，专用于禽流感灭活抗原鼻腔黏膜免疫的免疫效果。

二、背景技术

1呼吸道黏膜免疫的特点

鼻腔生理环境温和，抗原诱导免疫反应的阈值比较低。一些研究发现，鼻腔免疫既可有效的激发局部免疫应答，亦可诱导全身免疫应答。因此，鼻腔免疫越来越受到免疫学家们的关注。许多研究报道鼻腔免疫能够诱导呼吸道产生较高的特异性抗体水平。但是单独应用灭活苗通过鼻腔免疫一般不能有效的刺激机体产生免疫应答。最近发现，灭活苗配合免疫佐剂通过鼻腔免疫能诱导体内产生特异性抗。如将CpG和福尔马林灭活的流感病毒共同免疫动物，在血清、唾液和阴道分泌物中均能产生高水平的特异性抗体。Higaki等研究发现，流感灭活疫苗与聚苯乙烯磺酸钠树脂结合后在小鼠鼻内进行免疫，可诱导较高水平的IgA。Alan Coulter等曾报道用灭活的流感疫苗添加佐剂后鼻腔免疫小鼠，能够提高局部IgA水平和血清中IgG水平；国内外多许多学者证实鼻腔免疫动物后均能够诱导局部和全身的抗体应答。

2黏膜免疫佐剂的研究进展

目前，黏膜免疫佐剂已成为黏膜免疫的研究热点之一，黏膜免疫佐剂主要类型有细菌佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂、无机成分佐剂和投递系统。

研究发现卡介苗中含有特殊的核酸序列——单链CpG(胞嘧啶，鸟嘌呤)序列，能特异性的增加抗原的免疫原性。目前把含有未甲基化CpG基序的DNA、细菌的质粒DNA以及人工合成的寡核甘酸统称为CpG DNA，即核酸佐剂或具有免疫刺激作用的DNA序列(immunostimulatory sequences，ISS)，当将它们与蛋白质抗原的疫苗共同使用时，可诱导以细胞免疫为主的免疫反应。实验证实，CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)作为黏膜佐剂能促进机体对乙型肝炎表面抗原(HbsAg)的系统和黏膜免疫应答。CpG DNA可改进其它佐剂诱导Th2类型应答的缺点，如把CpG-ODN与CT或氢氧化铝等佐剂联用，先诱导出混合型的Th1和Th2类应答，然后转向Th1类型的应答。

细胞因子是机体在免疫反应时T淋巴细胞产生的免疫调节物质，细菌毒素与CpG都是通过细胞因子发挥佐剂效应的，而大多数细胞因子又具有调整和重建免疫应答的能力，因此可直接作为佐剂发挥作用。目前进行实验研究的主要有IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、GM-CSF等。IL-2是动物体内免疫应答的重要调节因子，具有多效性、高效性和反应快等特点，可以改善免疫功能，对多种抗原均有增强作用。IL-2在淋巴细胞的增殖过程中起轴心作用，可激发和维护淋巴细胞的生长，最终导致淋巴细胞的分化与增殖，维持免疫自身稳定。

应用氟化物作为黏膜免疫佐剂的研究已有报道。Sumio等研究发现黏膜佐剂NaF能够消除口服耐受，引起抗体反应增加。鸡同时口服抗原与NaF后，血清IgG抗体水平明显增加。尽管鸡群有个体差异，并且抗体滴度较低，但在胆汁和泪液中均检测到IgA抗体。氟化铝可诱导大鼠T细胞中多聚磷酸肌醇降解为磷酸肌醇，升高细胞内自由Ca2+，并使T细胞受体的γ和ε链进行磷酸化，从而T细胞进入活化的早期阶段。另外，合成多聚体和亲脂性季铵盐也可作为黏膜佐剂。

植物雌激素-大豆黄酮是一种存在于豆科植物中的植物异黄酮类化合物，具有雌激素样或抗雌激素样的双重作用。研究表明，植物雌激素对机体的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫均有不同程度的影响。植物雌激素可影响巨噬细胞的吞噬功能。高峰等在雏公鸡的基础日粮中添加大豆黄酮后发现雏鸡的免疫器官胸腺和法氏囊的相对重量显著提高，脾脏无明显变化，同时T淋巴细胞对植物血凝素(PHA)的刺激反应显著提高，说明雏公鸡细胞免疫增强。如果大豆黄酮能用作黏膜免疫佐剂，不仅可以提高动物的生产能力，还可以预防家禽的传染病。

3黏膜免疫佐剂在预防禽流感中的意义

禽流感(Avian Influenza，AI)是由正黏病毒科A型流感病毒属的流感病毒引起的一种烈性传染病，它不仅给世界的养禽业造成了巨大的损害，而且对人类的健康和生命安全亦构成了严重的威胁。禽流感病毒具有极强的抗原变异性，容易从弱毒株变异成高致病力毒株，所以预防禽流感不宜使用弱毒疫苗。目前禽流感油乳剂灭活苗通过肌肉注射是养鸡场常用预防禽流感的办法。但肌肉注射常常导致动物过强的应激反应从而影响动物的生长，此外，油乳剂注射到肌肉后还可引起肌肉品质的降低。因此寻找一条有效的免疫途径势在必行。