[发明专利]谷氨酸诊断/测定试剂盒及谷氨酸浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种谷氨酸诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定谷氨酸浓度的方法，属于医学/食品检验测定技术领域。

背景技术

中华人民共和国国家标准GB5009-2003味精卫生标准分析方法有：1.旋光计法2.甲醛滴定法3.凯氏定氮法。味精系指以粮食及制品为原料经发酵提纯的谷氨酸钠。

酶法分析是国际上公认的谷氨酸盐的分析方法，已被多个国际权威组织或机构采纳：如IFU(国际果汁生产者协会)，AIJN(欧盟果蔬汁及饮料生产者联盟)，及MEBAK，OICC，VDLUFA等组织广为推崇，并确定为标准检测方法。已被写入澳大利亚，荷兰，德国，瑞士等多个国家的食品法。国内也有数家果汁、酒类加工企业使用酶法试剂盒作为检测标准。

生物体内存在分解骨质的破骨细胞和形成骨骼的成骨细胞，正常情况下两种细胞的作用保持着良好的平衡。如果平衡被打破、破骨细胞过于活跃，就会导致骨质疏松。破骨细胞中含有谷氨酸，而一种名为“谷氨酸转运体”的蛋白可以将谷氨酸排出破骨细胞，被“释放”的谷氨酸会和细胞表面的受体结合，激活细胞内的酶，抑制破骨细胞分解骨质的作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400-700nm波长处吸光度的上升，得以测定谷氨酸浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的谷氨酸诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行谷氨酸浓度测定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明谷氨酸浓度测定方法原理如下：

L-谷氨酸+氧+水谷氨酸氧化酶氨离子+2-酮戊二酸酯

                                    +过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或

                                  醌亚胺色原+水

这个方法应用谷氨酸氧化酶(glutamate oxidase；EC 1.4.3.7；EC 1.4.3.11)偶联过氧化物酶(peroxidase；EC 1.11.1.7)酶促反应终点/速率比色法。谷氨酸氧化酶酶解谷氨酸反应，再通过偶联过氧化物酶的作用，最后生成的过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处，测定染料-吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)-含量高低的光吸收大小；通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的程度/速度，得出谷氨酸浓度大小测定结果。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分关系的本发明谷氨酸诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                        100mmol/L

稳定剂                        500mmol/L

过氧化物酶                    30000U/L

谷氨酸氧化酶                  10000U/L

还原型色原体组合              0.1--20mmol/L

所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-双乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-双氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙