[发明专利]半乳糖诊断/测定试剂盒及半乳糖的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种半乳糖诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定半乳糖浓度的方法，属于医学/食品检验测定技术领域。

背景技术

牛奶在营养界素有“液体黄金”的美称，我国早在1992年由七部位联合提出：“一杯牛奶强壮一个民族”的口号。奶类除不含纤维素外，几乎含有人体所需要的各种营养素。牛奶中的乳糖进入人体后，经小肠乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是婴儿大脑发育的必需物质，与婴儿大脑的迅速成长有密切关系。

牛奶虽好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人体不能很好的消化吸收牛奶中的营养素，还会造成钙、磷、钾、铁等元素的吸收障碍，影响婴幼儿的体格和智力发育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨质疏松的重要原因。中国成年人饮用牛乳后乳糖吸收不良的发病率高达86.7％，不耐受指数为0.9。

为了避免不适当饮奶对健康造成的损害，因此最好在饮奶前检查自己是否耐受乳糖，在饮用牛奶后，测试尿液中半乳糖的浓度，这是目前国外最常用的一种方法，更为简便、经济、可靠。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定半乳糖浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的半乳糖诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行半乳糖浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明半乳糖浓度测定方法原理如下：

半乳糖+氧半乳糖氧化酶半乳糖hexodialdose+过氧化氢

过氧化氢+辅酶NAD(P)H氧化酶还原型辅酶+氧

这种方法应用半乳糖氧化酶(galactose oxidase；EC 1.1.3.9)偶联NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H oxidase；EC 1.6.3.1)酶促反应速率比色法/终点法。半乳糖氧化酶酶解半乳糖反应产生过氧化氢，再通过偶联NAD(P)H氧化酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，通过测量340nm处吸光度上升的程度/速度，可以测算半乳糖的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明半乳糖诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                            100mmol/L

稳定剂                            500mmol/L

辅酶                              3mmol/L

半乳糖氧化酶                         10000U/L

NAD(P)H氧化酶                        12000U/L

本发明的半乳糖诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、辅酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。

辅酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、NAD(P)H氧化酶。

试剂3

缓冲液、稳定剂、半乳糖氧化酶。

辅酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。